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高通量测序-转录组测序及分析,数据深入挖掘

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所在地区:
中国北京
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长期有效
最后更新:
2021-06-01 01:30:02
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产品详情

品牌名称:
提供商: 西农生(北京)生物技术有限公司
服务名称: 高通量测序-转录组测序及分析,数据深入挖掘
  转录组测序及分析,数据深入挖掘
 
Illumina 2500 高通量测序平台,通过信息分析,可获得基因表达差异信息、SNP 分析、预测新转录本等信息,为研究基因的结构和基因的表达调控提供了重要的手段。   
 
 
样品要求
样品需求量(单次):≥5μg;
样品浓度:≥80 ng/μL;
样品纯度:OD260/280≥1.8;OD260/230 ≥1.8;RIN ≥6.0,23S:16S≥1.0
 
实验流程
提取样品总RNA后,用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物mRNA(若为原核生物,则用试剂盒去除rRNA后进入下一步)。加入fragmentation buffer将mRNA打断成短片段,以mRNA为模板,用六碱基随机引物(random hexamers)合成第一条cDNA链,然后加入缓冲液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I合成第二条cDNA链,在经过QiaQuick PCR试剂盒纯化并加EB缓冲液洗脱之后做末端修复、加poly(A)并连接测序接头,然后用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择,最后进行PCR扩增,建好的测序文库用Illumina HiSeq™ 2500进行测序。
 
 
分析流程及内容:
 

 
标准信息分析
l  对原始数据进行去除接头和低质量reads的处理
l  测序评估
l  基因表达注释
l  基因差异表达分析
l  预测新转录本
l  等位基因差异表达分析(需正反交实验设计)
 
无参考序列信息分析
l  对原始数据进行去除接头序列及低质量reads的处理;
l  数据产出统计及测序数据的成分和质量评估;
l  组装结果分析(Contig长度分布、Unigene*长度分布);
l  Unigene  功能注释及COG分类;
l  Unigene  的GO分类;
l  Unigene  代谢通路分析;
l  预测编码蛋白框(CDS);
l  Unigene  表达差异分析;
l  Unigene  在样品间的差异GO分类和Pathway 富集性分析;
l  SNP  分析;
l  SSR  开发及引物设计;
l  主成分分析(五个或五个以上样品);
l  条件特异表达分析(五个或五个以上样品)
 
数字基因表达(DGE
  • 基因表达水平分析
  • 差异表达基因分析
  • GO/KEGG
  • 蛋白相互作用
  • 基因共表达网络构建
 
 
 可根据需求进行个性化分析,提供分析代码,客户可重现分析。
 
 
另:提供单细胞测序、LncRNA测序等。

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