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细胞转染
细胞生物学功能检测-细胞生长、周期、
Hypoxia信号通路报告基因检测
[VIP第1年] 指数:3
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(原核)可溶蛋白表达实
蛋白质纯化实验服务
NF-KB p65活性检测实
MALDI-TOF/TOF质谱鉴
DIGE技术实验服务
多肽合成与修饰技术服
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病理切片实验技术服务| 提供商： | 晶莱生物 |
| 服务名称： | 细胞膜片钳实验服务 |
| 规格： | 细胞膜片钳实验服务 |
实验技术简介：
【晶莱生物】一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的或 多个的离子通道分子活动的技术。膜片钳技术是用微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，以千兆欧姆以上的阻抗使之封接，使与电极尖开口处相接的细胞 膜的小区域（膜片）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定点位，对此膜片上的离子通道的离子电流（pA级）进行监测记录的方法。
实验技术原理：
膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、 面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来，由于电极尖端与细胞膜的高阻封接，在电极尖端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离，因此， 此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个极为敏感的电流监视器（膜片钳放大器）测量此电流强度，就代表单一离子通道电流。
实验操作流程：
1、标本制备：根据研究目的的不同，可采用不同的细胞组 织，如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等，现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所采用的细胞，必须满足实验要求，一般多采用酶解分离法，也可采用细 胞培养法；另外，由于与分子生物学技术的结合，现在也运用分子克隆技术表达不同的离子通道，如利用非洲爪蟾卵母细胞表达外源性基因等。
2、电极制 备：合格的膜片微电极是成功封接细胞膜的基本条件。要成功的封接细胞膜需要两方面的因素保证，一是设法造成干净的细胞膜表面，二是制成合格的电极。首先要 选择适当的玻璃毛细管，其材料可使用软质玻璃（苏打玻璃、电石玻璃）或硬质玻璃（硼硅玻璃、铝硅玻璃、石英玻璃）。软玻璃电极常用于作全细胞记录，硬质玻 璃因导电率低、噪声小而常用于离子单通道记录。
3、膜片钳实验系统：根据不同的电生理实验要求，可以组建不同的实验系统。
4、进行实验，记录和分析数据。
实验注意事项：
客户提供：
1、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；
2、实验信息：离子通道名称及亚型。
交付标准：
1、细胞膜电位的时程图
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）
其他：
1、减少噪音，避免电极前端的污染，提高封接成功率，
2、记录模式，为记录特定离子电流
3、选择电极内、外液
4、选择阻断剂、激动剂
5、正确的数据采集
6、在形成高阻抗封接后，记录实验结果之前，通常要根据实验的要求进行参数补偿，以期获得符合实际的结果。
膜片钳使用的基本方法是，把经过加热抛光的玻璃微电极在液压推进器的操纵下，与清洁处理过的细胞膜形成高阻抗封接，导致电极内膜片与电极外的膜在电学上和化学上隔离起来，由于电性能隔离与微电极的相对低电阻（1～5MΩ），只要对微电极施以电压就能对膜片进行钳制，从微电极引出的微小离子电流通过高分辨、低噪声、高保真的电流-电压转换放大器输送至电子计算机进行分析处理。膜片钳技术实现的关键是建立高阻抗封接，并能通过特定的记录仪器反映这些变化，因而，膜片钳实验室除了一般电生理实验所需的仪器外，还特需防震工作台、屏蔽罩、膜片钳放大器、三维液压操纵器、倒置显微镜、数据采集卡、数据记录和分析系统等。
收费标准/服务周期/提供结果：
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