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细胞转染（瞬时转染和
MTT检测| 提供商： | 上海丰恒 |
| 服务名称： | ELISA实验 |
| 规格： | 具体报价根据实验设计和样本量 |
技术简介
1)技术原理:
酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主，以下为各种方法之介绍。
a . 三明治法
三明治法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:
- 将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
- 加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
- 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结
- 洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结
- 洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果
三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。
b . 间接法
间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：
- 将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原
- 加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结
- 洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结
- 洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
c . 竞争法
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
- 将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
- 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
- 加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
- 洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。
- 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
2)结果判断
定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出”有”或”无”的简单回答，分别用”阳性”、”阴性”表示。”阳性”表示该标本在该测定系统中有反应。”阴性”则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
定量测定
ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
服务内容
您需要提供以下材料：
细胞上清和血清等，试剂盒(可代购)。
您将获得以下结果：
数据，标准曲线
