规格: | 具体报价根据实验设计和样本量 |
技术简介
1)技术原理:
原代培养是指从机体取下细胞、组织或器官后,在一定的体外环境条件下立即进行培养。较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质。可用于模拟体内环境的体外实验。
2)实验步骤:
1.取材(以胚胎小鼠为例):将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。
2.用Hanks液洗涤3次,剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织。
3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2—3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。
4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10—30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加人少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5-10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。原代培养 原代培养
5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4-5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
服务内容
您需要提供以下材料:
细胞名称,属性和数量。
您将获得以下结果:
10代以内,纯度90%以上的哺乳动物细胞培养体系,和使用保存说明。