重组蛋白表达

提供商：	北京百奥利德生物
服务名称：	重组蛋白的表达

一．重组蛋白定制
重组蛋白表达技术可用于多种下游应用，包括基因调控分析、蛋白结构及功能分析、蛋白质间相互作用分析等。对于特定的应用，使用正确的蛋白表达系统是实验成功的重要因素。在选择蛋白表达系统时，所需考虑的最重要因素是生物活性、溶解性、速度及得率等。艾柏森生物依托深厚的技术实力和经验丰富的项目经验和专业的蛋白表达、纯化技术，可提供基于原核、酵母、昆虫杆状病毒、哺乳动物细胞、无细胞蛋白表达体系等多种蛋白表达系统的毫克至百克级高纯度蛋白定制服务。
四种蛋白表达系统的优缺点： 
1.大肠杆菌表达系统
大肠杆菌表达系统，代谢途径和基因表达调控机制研究透彻，培养周期短，目标基因表达水平高，遗传背景清楚，是目前应用最为广泛的表达系统。北京百奥利德生物技术团队有多年蛋白表达经验，精心筛选出多个高效表达载体及配套菌株，为国内外药企及科研客户提供大肠杆菌表达服务，所提供蛋白产品服务涵盖病毒蛋白，兽用疫苗，植物及水产研究用蛋白，细胞因子，酶类等方面。
 
百奥利德生物大肠杆菌表达系统优势
　　1. 百奥利德生物针对于有些外源基因在大肠杆菌中重组表达会形成膜包裹的高密度、不溶性蛋白质的包涵体的情况，对多种表达条件进行针对性的表达优化，尽量降低形成包涵体的几率。同时通过评估确定最佳的复性条件，进行温和的包涵体変复性。我们提供的复性蛋白纯度在95%以上
　　2. 可提供经过筛选的多种大肠杆菌表达载体：满足特定蛋白质胞内表达及周质空间分泌表达需求，也可利用SUMO、Trx、GST和NusA等促溶标签解决蛋白自身疏水性造成不可溶表达问题。
　　3. 多种大肠杆菌表达宿主：标准表达菌株BL21，高效表达菌株T7E，毒性蛋白表达菌株C41，增强蛋白可溶性表达的超低温菌株（可低至12℃进行诱导表达），以及其它特殊表达菌株，满足客户的不同需求。
　　4. 大规模生产：我们拥有10L、100L、500L和1000L的发酵罐,可满足每批次1-1000 L的生产规模。
5. 一站式服务：基因设计及优化、蛋白表达条件优化、蛋白纯化及后续加工处理（标签去除、内毒素去除及鉴定、 MS鉴定）、数据及报告整理。 
服务流程 
2.枯草芽孢杆菌表达系统
原核表达系统中，大肠杆菌表达系统应用最为广泛，操作简单，生产成本低廉，体系也非常成熟和完善。但其最大缺点是目的蛋白只能表达于胞内和周质空间，虽然也有一些信号元件可以实现这个功能，但是远远没有芽孢杆菌容易和高效。枯草芽孢杆菌可直接分离蛋白质到培养基中，它作为一种对环境无害的革兰氏阳性细菌且能分泌表达已广泛应用于医药和食品行业。
枯草芽孢杆菌表达系统相对于大肠杆菌表达系统的其它优势如：非致病性、细胞壁组成简单、重组表达的蛋白内毒素低、较低密码子偏爱性、表达蛋白可溶性高、生物活性好。相对于真核表达系统，其表达周期短，成本低，表达量较高。
 
百奥利德生物枯草芽孢表达系统优势
　　拥有适用于分泌表达及胞内表达的菌株以及对应的多种表达载体，可以满足客户不同表达需求。
1.高效转化技术的开发：百奥利德开发的基因高效转化体系，有效缩短转化时间，大大提高了枯草芽孢杆菌的阳性转化率　　
2. 大规模生产：我们拥有10L、100L、500L和1000L的发酵罐,可满足每批次1-1000 L的生产规模
3 .特别适合scFV及其他功能性小分子蛋白表达
　　3. 一站式服务：基因设计及优化、蛋白表达条件优化、蛋白纯化及后续加工处理、大规模发酵纯化
 服务流程  
3.酵母表达系统
酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点，培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉，蛋白翻译后能进行正确加工、修饰，合理的空间折叠，使得蛋白的可溶性大幅度提高，是最理想的重组真核蛋白生产制备工具。
百奥利德生物具有丰富的酵母蛋白表达的经验，成功表达出超过200种重组蛋白。我们具有筛选酵母表达高拷贝菌株及构建稳定过表达酵母菌株的服务，可以满足客户的多种特殊需求。我们利用酵母表达系统成功表达过具有二硫键蛋白及糖基化蛋白，使蛋白具有类似天然的结构和翻译后修饰，保证了蛋白的活性。
酵母系统表达的过程中，对诱导时间及温度的控制，对培养条件和菌株生长周期的把握直接影响到重组蛋白表达的成败，百奥利德的技术人员拥有对整体流程精确的把握和控制，最大限度的提高表达的成功率及表达水平。
 
服务优势
·表达宿主包括酿酒酵母和毕赤酵母，项目成功率高
·高生产率：独特的分泌信号序列保证了重组蛋白的最大分泌量
·大规模生产：高达1000L的生物反应器保证克级水平蛋白的生产
·多种菌株和载体可供选择：我们提供包括X33, GS115, SMD1168等多种菌株和多种载体
项目流程
 
 
4.昆虫-杆状病毒表达系统
昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统，它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加工功能，如二硫键的形成、糖基化及磷酸化等，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白；其最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%；可表达非常大的外源性基因(约200kD)；具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个外源基因的能力；
 
百奥利德生物杆状病毒-昆虫蛋白表达服务，采用经典的Bac-to-Bac 表达体系，并加以改进。在表达方式（胞内或分泌），信号肽选择，细胞培养方式及细胞选择（Sf9、Sf21、Hi5）方面有着丰富的项目经验。可为国内外药企，高校及科研客户提供高达500L的蛋白表达纯化服务。
常见的表达细胞及特征：


 
百奥利德生物昆虫-杆状病毒表达系统的优势：
1.利用经典Bac-to-Bac技术，打造了一个快速简便高效的杆状病毒表达平台。该技术能够快速地产生重组病毒，而且不需要繁琐的空斑分析，大大提高了效率。
2. 蛋白生产的周期短，通量大。可以实现细胞从小规模培养到大规模发酵的过程，使得蛋白产物甚至可以达到50mg的级别。
3.一站式服务
项目流程
 
 
5.哺乳动物细胞表达系统
哺乳动物蛋白表达系,具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能，使其蛋白更接近天然蛋白，从而获得与天然蛋白相同的生物活性。因此使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物，特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有最为广泛的应用。
百奥利德生物哺乳动物细胞表达系统优势
　　1. 百奥利德生物哺乳动物细胞表达系统表达成功率高达90 %以上
　　2. 可提供多种表达方式：瞬时转染表达、稳定细胞株表达服务、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)
　　A. 瞬时转染表达： 采用无血清培养基培养的多种细胞系(293或CHO悬浮细胞）可供选择，自主知识产权的高效表达载体可以大幅度提高表达量，自制及商业化转染体系为客户提供多种选择。
　　B. 稳定细胞株构建：多种自主知识产权的改造细胞系可为客户提供蛋白及抗体药物研发生产服务。
　　3. 大规模生产：无血清悬浮细胞培养每批次可达200 L。
4. 一站式服务：基因设计及优化、瞬时转染、稳定细胞株构建、重组抗体生产。
 
服务流程
 
 
6.无细胞蛋白表达系统
 
服务简介
无细胞表达系统是一种区别于传统蛋白表达系统的新型蛋白制备系统，以外源DNA或mRNA为模板，利用细胞抽提物中的细胞器，蛋白折叠因子及其他相关酶系，通过添加氨基酸和T7聚合酶和能量物质来实现蛋白表达的体外系统。主要有细菌无细胞蛋白表达系统和哺乳动物无细胞表达系统。
我们优化了数个无细胞的重组蛋白快速合成表达系统，利用了细菌、兔网织红细胞、CHO及人源裂解物等多种系统。细菌系统非常适于进行高得率蛋白制备，而哺乳动物系统则更适用于制备需要天然翻译后修饰的蛋白质。人及CHO细胞系所制得的蛋白质通常都具有完整长度和功能活性，且得率相比使用兔网织红细胞裂解物时更高。
 
各中无细胞表达系统比较


无细胞表达系统的优势
1. 　更快得到数据：仅需1小时即可获得功能蛋白
2. 　节省时间：表达蛋白可以直接用于后续实验，不需要额外纯化。
3. 　更适用于激酶等毒性蛋白的表达、也可使用经过修饰的tRNA来进行标记，在某特定位点掺入非天然的氨基酸。
4. 　表达的蛋白可用于蛋白-蛋白互作实验；蛋白-核酸互作实验，蛋白修饰等多种特征分析。
百奥利德生物无细胞表达系统服务流程
1. 　根据客户的要求选择合适的表达系统
2. 　模板的设计与制备
3. 　蛋白表达
4. 　样品分析（蛋白-蛋白相互作用、蛋白-核酸相互作用、蛋白修饰）
5. 　提交报告