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iTRAQ定量蛋白质组学

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所在地区:
中国上海
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长期有效
最后更新:
2021-07-26 18:47:04
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107

产品详情

品牌名称:
服务名称: iTRAQ
提供商: 上海中科新生命生物科技有限公司
    iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI 研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,尔后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。
 
原理:(以下均以4标为例)
 

                                                 Figure 1.Structure of iTRAQ reagent

    iTRAQ的4种同位素标记试剂由4种相对分子质量分别为114、115、116和117的报告基团(reporter group),相对分子质量分别为31、30、29 和28 的质量平衡基团(balance group)以及一个相同的肽反应标记试剂基团(peptide reactive group)组成。不同的报告基团分别与相应的平衡基团相配后,相对分子质量均为145,即等量异位标签(isobaric tag)。
    将蛋白质裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的,即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测,分子量完全相同,用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离,产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团,不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时,多肽内的酰胺键断裂,形成一系列b 离子和y 离子,得到离子片段的质量数,通过数据库查询和比较,可以鉴定出相应的蛋白质前体.
 
实验流程:



技术特点:
1.可同时标记2~8 个样本。
2. iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可标记修饰后的氨基酸,因此对磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白进行定性定量研究。
4.报告离子的相对分子质量较低(113~121),低分子量区是质谱定性(质量确定)和定量(丰度比较)较为准确的区域,因此质谱检测更为灵敏可靠。

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