货号: | 21101ES60 |
供应商: | 上海翊圣生物科技有限公司 |
规格: | 100T |
产品名称 | 货号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit 碱性磷酸酶活性检测试剂盒 | 21101ES60 | 100T | -20℃ | 856 |
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,简写为ALP或AKP),又称碱性磷酸酯酶,是一组同工酶,目前已发现六种ALP1-ALP6。广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织,是经肝脏向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解,从而将底物分子上的磷酸基团去除,转化为羟基。此类底物包括核酸(DNA、RNA)、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等;生物学中碱性磷酸酶(ALP)水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标,如:1)作为iPS成功诱导的标志;ALP在大多数细胞类型中均有表达,但是在iPS细胞内的表达水平明显升高;2)结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标;3)血清中碱性磷酸酯酶的升高可导致高碱性磷酸酶血症,常被认为和恶性胆管阻塞,原发性硬化胆管炎,肝癌,肝硬化等肝胆疾病密切相关;4)血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨骼损伤导致的骨生成,以及骨骼疾病如纤维骨炎、佝偻病、成骨不全等密切相关;5)碱性磷酸酶水平也会出现一些病理性降低的情况,多见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。对于正常成人来说,血清内ALP的范围为40-150U/L。
对硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,碱性条件下,可在ALP作用下生成对硝基苯酚(p-nitrophenol, pNP),后者在碱性环境下呈黄色产物,并在405nm处可检测到最大吸收峰。产物黄色越深,说明ALP活性越高,反之则活性越低。因此,通过检测OD405吸光值即可计算ALP活性水平。
本品为碱性磷酸酶活性检测试剂盒,可快速、便捷地检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等样品中的ALP活性。该试剂盒包括标准品和空白对照,可进行达100个样品的检测。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格(100T) | 储存方法 |
21101-A | ALP反应缓冲液 ALP Assay Buffer | 15ml | -20℃ |
21101-B | 显色底物 pNPP Substrate | 2管 | -20℃避光 |
21101-C | pNP标准品溶液p-nitrophenol Standard | 100ul (10mM) | -20℃避光 |
21101-D | 反应终止液 Stop Solution | 12ml | -20℃ |
冰袋运输。-20℃保存,一年有效。其中显色底物、pNP标准溶液需要避光保存。
注意事项
1)如果进行酶活力的绝对定量,进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间,以减小操作过程中的时间误差。如果样品中酶活性较高,则可以预先适当稀释样品。
2)样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。
3)ALP反应缓冲液和p-nitrophenol标准品溶液对人体有害,请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性,请小心操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
2)血浆、血清和尿液的准备:血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。【注】:血浆制备不能用含EDTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存,避免反复冻融。
3)样品的稀释:若样品中含有较高活性的ALP,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可以采用试剂盒中的ALP反应缓冲液进行稀释。若使用上述反应缓冲液进行稀释,需保留足够的缓冲液用于试剂盒的检测过程。
3.加样
参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μl,样品通常可以直接加50μl。如果样品中的碱性磷酸酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
5. 孵育:37℃孵育5-10min。(待测样品中ALP活性较低时,可适当延长孵育时间至30min)
6. 终止:每孔加入100μl反应终止液终止反应。此时,标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。
7. 检测:405nm测定吸光度。如果不能测定405nm,也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定,可以在数小时内完成测定,所显现的黄色在数小时(≤ 6h)内稳定。
8. 结果分析
碱性磷酸酶活性单位的定义:在pH9.8的二乙醇胺(diethanolamine, DEA)缓冲液中,37℃条件下,每分钟水解pNPP显色底物产生1μM p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中,25℃条件下,每分钟水解pNPP显色底物产生1μM p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个甘氨酸酶活力单位。一个甘氨酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。
最后,根据酶活性单位的定义,计算出样品中的碱性磷酸酶活性。