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MBI内切酶
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纳米碳粉：Carbon：BJHY-1121530
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4'-6-DIAMIDINO-
MC3R-CRE-BLA CHO-K1 
LightShift Chemilumi| 货号： | 20427ES80 |
| 供应商： | 上海翊圣生物科技有限公司 |
| 英文名： | Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) |
| 保存条件： | -20℃ |
| 规格： | 1000U |
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 | 20427ES80 | 1000U | -20℃ | 936.00 |
Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 20427-A | Alkaline Phosphatase (30 U/μl) | 1000U |
| 20427-B | 10×AP buffer | 1ml |
| 来源（Source） | 携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
| 质量控制（Quality Control） | 无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
| 热灭活（Thermal Inactivation） | 在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。 |
| 储存液条件（Storage conditions） | 10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol. |
| 活性定义（Unit definition） | 在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
| 最佳pH（Optimal pH） | 该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
| 优化体系（Optimal Buffer） | AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2) |
干冰运输。-20℃保存，本酶在保存条件下及其稳定。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
| 无菌ddH2O | Up to 50µl |
| DNA 片段* | 1-20pmol |
| Alkaline Phosphatase | 1-2µl |
| 10×AP buffer | 5µl |
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
2 酚氯,仿法抽提DNA
① 苯酚/氯,仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② 氯,仿/异戊醇（24:1）抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。
4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。
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温馨提示：不可用于临床治疗。
