货号: | A014-2-1 |
样本: | 动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等 |
标记物: | 见说明书 |
适应物种: | 植物,大小鼠 |
应用: | 见说明书 |
检测方法: | 比色法 |
检测限: | 见说明书 |
供应商: | 上海雅吉生物科技有限公司 |
规格: | 25管/24样/50管/48样 |
总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒NO化学性质活泼,体内代谢转化为硝酸盐(NO3¯)和亚硝酸盐(NO2¯),血清(NO3¯)与(NO2¯)浓度之和(NO3¯┼NO2¯)才能准确代表体内(NO)水平。血清(NO3¯┼NO2¯)含量测定,国内有的单位采用金属镉还原法,但该法操作繁琐(血清需除蛋白),反应不易控制(金属镉可将NO2¯进一步还原),且不能完全将NO3¯还原为 NO2¯,准确性差。
本测试法为一种灵敏、简便、快速、稳定、易推广的方法。
NO化学性质活泼,在体内代谢很快转为NO2¯和NO3¯,而NO2¯又进一步转化为NO3¯,本法利用硝酸还原酶特异性将NO3¯还原为NO2¯,通过显色深浅测定其浓度的高低。
总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒产品优点如下:
1、快速简便:全程约2小时,可测100例以上样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.7%。
4、回收试验: X =103.3%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血液、组织、细胞、各种培养细胞、脑脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物组织以及各种水产效果均佳。
总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒产品图片;
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、台式离心机
5、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入样本和R1、R2混合试剂,37℃水浴60分钟
2、加入R3、R4,抽提室温静置40分钟,3500~4000转/分,离心10分钟
3、取上清0.5 ml,加入显色剂,静置10分钟,550nm波长,0.5cm光径,比色
总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒技术参数
批间CV | 批内CV | 回收率 | 最底检出线 | 检测范围 |
6.01 | 2.1 | 104 | 0.2U/ml | 0.2-81.9U/ml |
本试剂盒保存期:3个月,贮存温度:2~8℃,特别提醒R1、R2以及标准品需放在-20℃以下冷冻保存。
发表文章
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植物组织样本的前处理
一、匀浆介质
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、组织匀浆的制备
1、取组织块(0.2g~0.5g)最少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:4的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。
① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成20%的匀浆液。
② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成20%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),
镜检观察:取少量组织匀浆作涂片(直接涂片、染色均可以),显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。
4、将制备好的20%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.
三、样本保存:
植物组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如不反复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。
制备好的匀浆液建议不要冻存,最好当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,总蛋白测定可存5~7天等)
一总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒本研究所郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到,如有质量问题,本研究所负责包退包换。