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NEB,C3019H,NEB 10-beta Competent E.
5,5-二巯基-2,2-二硝基苯甲酸69-78-3
Rabbit Polyclonal Anti-ANKH Antibod
[VIP第1年] 指数:3
通过闵行区市场监督管理局认证 
Anti-Human CD99 PE 2
AsPC-1细胞【通过STR
人霍奇金淋巴瘤；Hs 6
GCLC试剂盒
THOP1试剂盒
Trx试剂盒| 货号： | HZ10043 |
| 供应商： | 上海沪震生物科技有限公司 |
| 数量： | 大量 |
| 保质期： | 1年 |
| 保存条件： | 4度保存和运输 |
有效shRNA筛靶套餐
服务简介：
软件设计或者现有shRNA 库通常可以提供3-5条shRNA ，但是在RNA干扰主体实验中，一般用1-2条shRNA进行实验即可。因此，在进行RNA干扰主体实验之前，有必要进行有效shRNA的筛选，在3-5条shRNA中筛选1-2条干扰效率最高的shRNA ，以进行后续实验。
如果目的细胞的质粒转染效率较高( 大于70%) ，则有效shRNA的筛选可以直接在日的细胞中进行，即所谓的"内源筛靶" 。而如果目的细胞的质粒转染效率一般(小于70%) ，则有效shRNA 的筛选可以在293 、CHO等工具细胞中进行，即所谓的"外源筛靶"。
无论是内源筛靶，还是外源筛靶，其基本步骤都包括:
- shRNA表达载体构建；
- 目的基因过表达载体构建( 内源筛靶可省293等工具细胞中如有目的基因的高表达，亦可省去此步骤)；
- 细胞培养及转染；
- RNA干扰效率检测(RT-PCR 、Westem-blot等)。
本公司根据以上服务内容，推出有效shRNA筛靶套餐，包括有效shRNA内源筛靶套餐(S2003) 、有效shRNA外源筛靶套餐(S2004) ，您可以根据需要订购相应的筛靶套餐。
TIPS :什么情况下选择外源筛靶？
- 目的细胞不易得到，例如原代细胞、稀有细胞株，或者目的细胞暂时还未到位；
- 目的细胞转染效率低(转染效率低于70%)；
- 目的细胞需要诱导才能表达靶基因；
- 目前尚无靶基因的抗体。
如果存在上述情况，您可以选择外源筛靶。选择外源筛靶时，有效shRNA的筛选通常在293 、CHO等工具细胞中进行。这些细胞培养容易、质粒转染效率高，是很好的研究平台。
如果293等工具细胞中有目的基因高表达，则可直接导入shRNA表达载体进行筛选。而如果293等细胞中目的基因表达量低，则需要额外共转染一个目的基因的过表达载体，人为地创造一个目的基因高表达环境，以便于shRNA的筛选和验证。在表达目的基因时，还可以带入EGFP 、RFP等荧光标记，或者Flag 、Myc 、His等标 签，以便于后续RNA干扰效果的检测。
温馨提示：不可用于临床治疗。
