提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 细胞生物学:EDU 细胞增殖实验服务 |
实验技术原理:EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
实验操作流程:
1、细胞培养:取对数生长期细胞,以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中,培养至正常生长阶段
2、药物处理:根据实验需要进行各种药物处理
3、EdU标记:用细胞培养基按1000:1的比例稀释EdU溶液 (试剂A),制备适量50μM EdU培养基;
注:1)EdU浓度与孵育时间相关,短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM),长时间孵育(>24h)宜采用低浓度 (1~10μM);
a.如果需配置10μM EdU培养基,需调整为5000:1稀释比例;
b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
4、细胞固定
5、Apollo染色
6、图像获取及分析
实验注意事项:
客户提供:
1、提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血;
2、提供新鲜的培养细胞,提供新鲜组织,需要实验室制备成单细胞悬液。
交付标准:
完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
其他:
建议染色完成后立即进行观测;如果条件限制,请避光4℃ 湿润保存待测,但不应超过3天
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