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山羊血清
无菌脱纤维兔血
CD Feed Y Supplement, Liquid
Cytogen外周血培养基
0.25%胰蛋白酶
秋水酰胺溶液
特级胎牛血清-中美血
PHA(植物血球凝集素)| 货号： | S001-2 |
| 供应商： | 达晖 |
| 数量： | 大量 |
| 英文名： | Lymphocyte Medium |
| 保质期： | 12个月 |
| 保存条件： | 4-8℃保存,有效期1个月；-5℃以下保存,有效期12个月，可稳定至保质期末 |
| 注册证号： | 粤穗械备20160342号 |
| 规格： | 5ml/支,50支/盒 |
【产品名称】
通用名称：细胞培养基
商品名称：优尔倍™ 细胞培养基
英文名称：Lymphocyte Medium
【包装规格】
5ml/支，50支/盒
【预期用途】本产品为细胞标本前处理试剂，仅用于细胞增殖培养，不具备对细胞的选择、诱导、分化功能，培养后的细胞用于体外诊断。
【主要组成成分】
基础培养基、植物血球凝集素（PHA）、胎牛血清等
【储存条件及有效期】
4-8℃保存,有效期1个月；-5℃以下保存,有效期12个月，可稳定至保质期末。
【样本要求】人外周血
【实验方法】
1、准备：如细胞培养基储存在-5℃以下冰箱，应按所需的量提前半天至一天转移至4℃冰箱保存；种血前把培养基取出放置室温，使培养基升至室温（约25-30℃）。
2、采血：由专业人员按无菌操作抽取待检者外周血2-3ml，注入肝素钠抗凝管，轻轻摇匀，使抗凝剂与血液充分混匀，防止凝固；
3、种血：在无菌条件下，种血0.3-0.5ml（脐带血及小儿可略少）至细胞培养基内.
4、培养：将细胞培养基放入37℃培养箱中，平放培养管（以液体刚好未触及胶塞为佳），培养68-72小时，培养期间注意观察培养基有无凝血、溶血或长菌的现象（可培养24小时后将培养基轻摇匀一次，以便细胞可获得充分的营养）。
5、制片：
5.1秋水仙素处理：
在终止培养前，加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3滴（7#针头垂直滴入）后，继续培养2-4小时。
5.2收获细胞：将培养完成的细胞培养基放入离心机，以1500rpm离心5-10分钟，弃上清，留沉淀细胞；
5.3低渗：向培养管内加入37℃预温的低渗液8ml，用吸管反复吹打均匀（约50次左右），置37℃水浴箱中低渗处理25-35分钟；
5.4预固定：向低渗的细胞悬液内沿管壁缓慢加入固定液（新鲜配制，甲醇和乙酸按3：1的比例混合）1-2ml，轻轻混匀后置室温下固定5-10分钟后，1500rpm离心5-10分钟，弃上清，留沉淀细胞；
5.5固定：沿管壁缓慢加入固定液6-8ml，轻轻混匀后置室温下固定20-30分钟，然后1500rpm离心5-10分钟，弃上清；留下沉淀细胞；
5.6再固定：重复第5.5步；
5.7滴片：在离心管中滴入新固定液0.2ml，（加固定液的量应根据沉淀物的量和制片后细胞的分布情况调整）； 将细胞悬液滴于用冰水预冷的载玻片上（一般高度为30cm±），每张载玻片上滴1-2滴，过火晾干。
5.8烤片：立即放入75℃烤箱中烤片3小时。
6、染色体显带 ：
将经烤片处理的载玻片放入37℃的0.25%胰酶溶液中（PH=7.2-7.4）消化20-90秒（根据显带效果调整胰酶作用时间，每次作用时间并不完全相同。可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间）再用0.85%NaCl溶液（预温至37℃）漂洗两次，在预温至37℃的吉姆萨溶液中染色约10分钟，自来水冲洗干净，风干后，即可阅片。
【注意事项】
1、本实验方法中所指室温条件均为：温度25-30度；湿度50%-60%。
2、采集的外周血若立即接种则无需加肝素抗凝，如需保存标本，应加肝素抗凝。
3、采集的外周血在冰箱4℃保存，保存期不能超过一周。
