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BIX 01294

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最后更新：: 2021-04-18 01:30:02

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货号：	S8006
规格：	10mg/10mM/1mL/25mg

Selleck Chemicals美国品牌，中国库存现货，Histone Methyltransferase抑制剂，CAS#1392399-03-9。
更多详情请访问中国唯一官方网站：http://www.selleck.cn/products/pha-767491.html

生物活性

产品描述	PHA-767491是一种有效的，ATP竞争性的，双重Cdc7/CDK9抑制剂，IC50分别为10 nM和34 nM，比作用于CDK1/2和GSK3-β选择性高20倍左右，比作用于MK2和CDK5选择性高50倍，比作用于PLK1和CHK2选择性高100倍。
靶点	Cdc7	Cdk9
IC50	10 nM	34 nM ^[1]
体外研究	PHA-767491 20倍选择性作用于Cdk1, Cdk2 和 GSK3-β,50倍选择性作用于MK2和Cdk5，100倍选择性作用于 PLK1 和 CHK2。PHA-767491 抑制多种人类细胞系增殖，IC50为从作用于SF-268 细胞的0.86 μM 到作用于K562细胞的5.87 μM, 且按p53非依赖方式几乎显著诱导所有细胞凋亡，而5-FU 或Gemcitabine 只作用于一小部分细胞系。不同于现在的DNA合成抑制剂，5 μM PHA-767491 阻断 DNA 复制开始而不是复制叉的进展，归因于Cdc7 激酶和Mcm2 在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化受特定抑制。^[1] 3 μM PHA-767491 处理抗ABT-737的 OCI-LY1 和 SU-DHL-4 细胞，显著降低上调的Mcl-1水平，可能因为 Cdk9受抑制, 导致对ABT-737的敏感性恢复。^[2] 1 μM PHA-767491作用于静态慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞，可观察到直接线粒体依赖性的促凋亡效果，EC50为0.34-0.97 μM。5 μM PHA-767491 处理 CD154 和IL-4刺激的增殖CLL细胞，通过抑制Cdc7而不是触发细胞死亡而废除DNA合成。^[3]
体内研究	PHA-767491 每天处理两次，持续5天，显著抑制HL60移植瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，按20 mg/kg 和30 mg/kg剂量处理，TGI分别为50% 和92%,这种效果在A2780, Mx-1, 和 HCT-116移植瘤模型和 DMBA诱导的乳腺癌中也很显著, 与Cdc7受抑制相关，随后降低Mcm2在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化。^[1]
临床实验
特征	PHA-767491是第一个通过控制 DNA 复制起始而不是延伸阶段而影响机制的抑制剂。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验: ^[1]

体外激酶实验	使用强阴离子交换实验测定PHA-767491 (IC50)抑制Cdc7 和 Cdk9的情况。对于每种酶，初步确定ATP的绝对K_m值和特定底物，然后在最佳 ATP/³³Pγ-ATP 混合物(2K_m) 和底物 (5K_m) 浓度进行每组实验。在含 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl₂,2 mM β-甘油磷酸, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄,2K_mATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 重组Cdc7/Dbf4，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行 Cdc7激酶实验，终体积为 30 μL, 在 25^oC下温育1小时。使用 50 nM 重组 Cdk9/cyclin T 在 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m RNA聚合酶CDT 肽，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行Cdk9激酶反应，终体积为30 μL,在 25^oC下温育1小时。温育后，加入150 μL 树脂/甲酸盐 (pH 3.0)，终止反应，捕获未反应的³³Pγ-ATP, 使其与溶液中磷酸化礼物分离。1小时后，50 μL上清液转移到Optiplate 96 孔板上。加入 150 μL Microscint 40后，在TopCount上计算放射性。

体外激酶实验

使用强阴离子交换实验测定PHA-767491 (IC50)抑制Cdc7 和 Cdk9的情况。对于每种酶，初步确定ATP的绝对K_m值和特定底物，然后在最佳 ATP/³³Pγ-ATP 混合物(2K_m) 和底物 (5K_m) 浓度进行每组实验。在含 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl₂,2 mM β-甘油磷酸, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄,2K_mATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 重组Cdc7/Dbf4，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行 Cdc7激酶实验，终体积为 30 μL, 在 25^oC下温育1小时。使用 50 nM 重组 Cdk9/cyclin T 在 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m RNA聚合酶CDT 肽，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行Cdk9激酶反应，终体积为30 μL,在 25^oC下温育1小时。温育后，加入150 μL 树脂/甲酸盐 (pH 3.0)，终止反应，捕获未反应的³³Pγ-ATP, 使其与溶液中磷酸化礼物分离。1小时后，50 μL上清液转移到Optiplate 96 孔板上。加入 150 μL Microscint 40后，在TopCount上计算放射性。

细胞试验: ^[1]

细胞系	HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, 和 NHDF
浓度	溶于DMSO,终浓度为~ 20 μM
处理时间	24 或72 小时
方法	使用 PHA-767491处理细胞24 或 72小时。裂解细胞，使用耐高温萤火虫荧光素酶实验测定孔中ATP含量，用来衡量存活细胞数。通过含特定促发光底物的荧光素酶实验，测量 caspase-3 和 caspase-7的活化，衡量实验组和对照组的比率。通过流式细胞仪测量DNA复制，衡量核苷酸类似物BrdU渗透进DNA的量。

动物实验: ^[1]

动物模型	皮下移植 HL60细胞的雌性SCID小鼠,皮下移植 HCT116细胞,A2780 或Mx-1细胞的雄性Hsd，无胸腺nu-nu 小鼠,和携带DMBA诱导的乳腺癌的雌性Sprague-Dawley大鼠
配制	溶于DMSO,然后在盐水中稀释
剂量	~50 mg/kg
给药处理	静脉注射或口服处理，每天两次。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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