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pEYFP-Tub载体
pETDuet-1载体
[VIP第1年] 指数:2
通过浦东新区市场监管局认证 
干细胞：间充质干细胞
ChemGel载干细胞水凝
划痕实验／伤口愈合4
细胞计数载玻片80816
表达谱测序 转录组| 货号： | chem-010A |
| CAS号： | / |
| 供应商： | 上海麒盟生物科技有限公司 |
| 数量： | 1 |
| 英文名： | / |
| 保质期： | 两年 |
| 保存条件： | -20℃ |
| 注册证号： | / |
| 规格： | 10 Tests |
【产品货号】chem-010A
【产品规格】10 tests
【保存条件】-20℃保存
【产品组成】
| Components | Volume(μl) |
| RNase free water | 100 |
| Positive control | 10 |
| Cell lysis buffer | 1000 |
| Myco mix (primer) | 15 |
| 2×Taq plus Mix Master | 125 |
支原体（Mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体。支原体的大小为0.2~0.3μm，可通过过滤器，大多数抗生素对其无效，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。对细胞的污染率高达15%~35%并且造成对免疫、代谢、生长状况、生化特性等的改变，严重影响到实验结果的可靠性、稳定性和准确性。目前检测支原体的方法有琼脂培养或肉汤、Giemsa染色法将其染成淡紫色、ELISA、直接或间接的PCR法，其中PCR法相较之下的灵敏度最高。本试剂盒利用PCR法监测细胞培养中的支原体。本试剂盒可检测Mycoplasma hyosynoviae(猪滑液支原体)、Mycoplasma orale(口腔支原体)等98%以上的细胞支原体污染。
【操作步骤】
样品的准备：细胞样品需在无抗生素的培养基上培养两周以上，待细胞密度为80%以上时可用于实验。
A 样品为细胞
1A. 收集1ml细胞悬液于1.5ml离心管中；
2A. 13000rpm离心1min，弃上清，收集沉淀；
B 样品为培养上清
1B. 收集1ml细胞培养上清于1.5ml离心管中；
2B. 13000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀；
3. 加入500μlPBS重悬沉淀，13000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀；
4. 加入100μl Cell lysis buffer，重悬沉淀，25℃水浴中孵育20min；
5. 将样品置于95℃水浴中加热5min；
6. 13000rpm离心5min，收集上清，作为模板进行PCR反应。
【PCR反应体系】
| 组分 | 检测样品 |
| RNase free water | 6 |
| Myco mix (primer) | 2 |
| 2×Taq plus Mix Master | 10 |
| Sample | 2 |
【PCR反应程序】
95℃ 3min
95℃ 20s
60℃ 20s 35cycles
72℃ 25s
72℃ 3min
7. PCR产物使用1%琼脂糖凝胶电泳30min。紫外凝胶成像系统下检测PCR产物条带
【结果判定】
| PCR模板 | PCR产物 | 判定说明 |
| 阳性对照 | 有255bp和370bp条带 | 阳性成立 |
| 无或只有一条条带 | 阳性不成立 | |
| 检测样品 | 有255bp和370bp条带 | 支原体污染 |
| 有255bp条带 | 无支原体污染 | |
| 无条带 | 细胞量过少或PCR反应被抑制 |
255bp条带为人、大鼠、小鼠同源序列条带，为内控条带
370bp条带为98%以上细胞污染支原体同源序列
温馨提示：不可用于临床治疗。
