货号: | Proteinase K |
供应商: | 祥生兴业 |
保存条件: | -20℃ |
规格: | 100mg |
蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从布氏白僵菌(Beauveria bassiana)中纯化得到,用于生物样品中蛋白质的一般降解。该酶有两个ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性,在尿素和SDS中也较为稳定,还具有降解天然蛋白质的能力。
规格:100mg/瓶 或客户定制
比活性值:38 U/mg蛋白
来源种属:酵母菌
分子质量:28,650
纯 度 : ≧99.2%
二、产品检测报告
1、稀释缓冲液
根据需要,利用20mM Tris-HCL 缓冲液(PH 7.5)溶解成20mg/ml的工作浓度。
活性单位定义 | 37℃、PH7.5条件下,每分钟可水解底物酪蛋白生成1μmol酪氨酸所需蛋白酶K的量,定义为一个单位。 |
脱氧核糖核酸酶残留 | 以λDNA为底物,37℃消化4小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。 |
核糖核酸酶残留 | 37℃消化12小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。 |
3、酶纯度测定(SDS—PAGE)
结果:蛋白酶K纯度超过99.2%。
4、酶活性测定
蛋白酶K比活性值 | ||
产品来源 | 本产品 | Sigma |
比活性值(U/mg) | 38 | >30 |
5、酶稳定性测定(—20℃冷冻条件下,12个月的数据)
结果:干粉状态正确储存,一年内酶活性保持不变;溶解状态酶活性一年内降低小于2%。
6、酶质检结果
序号 | 检验项目 | 检验标准 | 是否合格(合格√) |
1 | 动物基因组提取(蛋白酶K浓度为20mg/ml) | 不影响动物基因组的有效提取 | √ |
与不加蛋白酶K的样品相比,能有效降解蛋白质 | √ | ||
2 | 降解蛋白质能力 | 与15ug BSA 37℃孵育1小时,BSA可有效降解 | √ |
质检结论:合格(√) 让步放行( ) 需要复检( ) 不合格( ) |
三、抑制剂
蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶,因此可以用Phenylmethylsulfonyl fluoride抑制其作用,Phenylmethylsulfonyl fluoride是一种丝氨酸蛋白酶的抑制剂。在纯化蛋白质时用于防止蛋白质的降解。
四、应用范围
蛋白酶K的用途广泛,主要的应用行业包括:医疗及基础研究领域:基因诊断试剂盒;基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶;此外,还应用于:皮革工业(皮革软化及精细化、脱毛和软化、蚕丝脱胶)制备脉冲电泳的染色体DNA;提取组织中非蛋白成分时,降解含有蛋白质杂质;食品、酿造工业:肉类嫩化、酒类澄清;洗涤工业:酶洗衣粉、洗衣液等也有应用。
五、贮存和使用
干粉条件下有效期为24个月,液态时-20℃保存12个月。客户利用缓冲液溶解后,需要-20℃贮存。溶解后,最好分装成若干份,方便使用,避免反复冻溶。如果需要在2-8℃环境下放置,超过三天,建议过滤除菌或加入抑菌剂如3%叠氮化钠,防止微生物污染。
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
六、产品优势
蛋白酶K,是一种来源于新发现的真菌蛋白酶K基因,经优化后异源重组表达得到的切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于该蛋白酶K在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白质的能力,因而被广泛应用于制备脉冲电泳的染色体DNA、蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。
严格的对比实验研究表明,本公司产品蛋白酶K与现有市场上林伯氏白色念球菌来源的蛋白酶K产品相比,对大片段蛋白质的切割能力基本相同,而在小片段蛋白质的降解能力方面较其他产品活力高出50%以上。