货号: | EK-H11579 |
样本: | 人血清、血浆及相关液体样本含量 |
标记物: | 酶标记 |
适应物种: | Human/人 |
应用: | 请向客服索要说明书 |
检测方法: | 双抗夹心 |
检测限: | 详询 |
供应商: | 上海酶研生物 |
数量: | 大量 |
规格: | 96T/48T |
标本要求
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
- 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
- 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
问题分析
若实验效果不好,请及时对显色结果拍照,保留所用板条及未使用试剂,并妥善保存,然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料:
问题描述 | 可能原因 | 相应对策 |
标准曲线梯 度差 | 吸液或加液不准 | 检查移液器及吸头 |
标准品稀释不正确 | 溶解标准品稍微旋转瓶身,轻轻混匀使粉末完全溶解 | |
洗涤不完全 | 保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量 | |
显色很弱或 无色 | 孵育时间太短 | 保证充足的孵育时间 |
实验温度不正确 | 使用推荐的实验温度 | |
试剂体积不够或漏加 | 检查吸液及加液过程,保证所有试剂按顺序足量添加 | |
稀释不正确 | ||
读数数值低 | 酶标仪设置不正确 | 在酶标仪上检查波长及滤光片设置 |
提前打开酶标仪预热 | ||
变异系数大 | 加液不正确 | 检查加液情况 |
背景值高 | 检测抗体的工作浓度 | 使用推荐的稀释倍数 |
酶标板洗涤不完全 | 重新阅读操作手册,保证清洗完全;如果用自动洗板机,请检查所有的出口是否有堵塞 | |
洗液有污染 | 配制新鲜的洗液 | |
灵敏度低 | ELISA 试剂盒保存 | 按说明书要求保存相关试剂 |
读数前未终止 | OD 读数前应在每孔中加入终止液 |
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