3LL 细胞

货号：	ATCC-Y0955
生长状态：	优良
年限：	无限
运输方式：	常温
器官来源：	组织
是否是肿瘤细胞：	是/否
细胞形态：	/
供应商：	酶研生物
数量：	50-100万细胞数
规格：	T25

规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶
特点：细胞代数为2-3代
包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书
细胞来源：ATCC
货期：1-2周
运输方式：快递运输
售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真或E-mail致销售人员，我们将尽快为您解决。
                  上海酶研生物发布：温馨提示
 
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
一、 细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。从细胞资源中心获得细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。
二、 镜下观察：
未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，放入37℃、5%CO2孵箱培养；
超过80%汇合度时，按要求比例消化传代。
三、消化方法
1、将瓶装的完全培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。
2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，弃上清，再加1ml消化液消化，显微镜下观察，等细胞完全脱离瓶壁分离成单个后，加培养基混匀，离心收集，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培养基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培养
  [酶研生物]细胞专家为您分析细胞问题原因所在及解决方案
问题1：培养液pH值变化太快
可能原因
（1）CO2张力不对
（2）培养瓶盖拧得太紧
（3）NaHCO3缓冲系统缓冲力不足
（4）培养液中盐浓度不正确
（5）细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法
（1）按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。
（2）松开瓶盖1/4圈。
（3）改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。
（4）在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。
（5）丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变
可能原因
（1）洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来
（2）冰冻保存培养液
建议解决方法
（1）用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
（2）将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化
可能原因
   细菌或真菌污染
建议解决方法
   丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁
可能原因
（1）胰蛋白酶消化过度
（2）支原体污染
（3）培养瓶瓶底不干净
（4）培养液pH值过碱（NaHCO3分解）
（5）消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
（6）细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）
（7）接种细胞起始浓度太低或太高
建议解决方法
（1）缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
（2）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（3）注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶
（4）使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）
（5）重新配置消化液或培养液
（6）启用新的保种细胞
（7）调节最佳接种细胞浓度
问题5：悬浮细胞成簇
可能原因
（1）培养液中含钙、镁离子
（2）支原体污染
（3）蛋白酶过度消化使得细胞裂解释
（4）DNA污染
建议解决方法
（1）用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
（2）分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（3）用DNase I处理细胞。
问题6：原代细胞培养物污染
可能原因
   原代培养组织在进入培养前已污染
建议解决方法
   培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
问题7：培养细胞生长减慢
可能原因
（1）由于更换不同培养液或血清
（2）培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。
（3）培养物中有少量细菌或真菌污染
（4）试剂保存不当
（5）接种细胞起始浓度太低
（6）细胞已老化
（7）支原体污染
建议解决方法
（1）比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。
（2）换入新鲜配制培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。
（3）用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。
（4）血清需保存在-5℃到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2周内用完。
（5）增加接种细胞起始浓度。
（6）换用新的保种细胞。
（7）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
问题8：培养细胞死亡
可能原因
（1）培养箱内无CO2
（2）培养箱内温度波动太大
（3）细胞冻存或复苏过程中损伤
（4）培养液渗透压不正确
（5）培养液种有毒代谢产物堆积
（6）更多原因参考问题4和问题7
建议解决方法
（1）检测培养箱内CO2
（2）检查培养箱内温度
（3）取新的保存细胞种
（4）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260– 350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。
（5）换入新鲜培养液
欢迎进入酶研生物细胞中心,更多细胞请联系我们
 
★ 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC以及少数国内外大学建系。代数年轻活性好，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。           
★ ★ 由于现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞 价格及详细资料请老师联系我们，对您造成的不便还请见谅！
 
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