货号: | E1010 |
供应商: | 上海超研生物科技有限公司 |
数量: | 大量 |
保存条件: | 2-8度 |
保质期: | 12个月 |
规格: | 200次 |
测定原理:根据著名的Trinder反应,葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2);然后,过氧化物酶(POD)催化过氧化氢,色原物质生成红色醌亚胺类化合物,颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。在500nm处检测吸光度(OD)值可测量葡萄糖含量。
适用: 测定血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。
组成与储存:(200次微量检测):
1. 葡萄糖标准品 5 mM (等于90 mg/100 ml或90 mg/dl),1 ml,4ºC数月稳定,-20ºC长期保存。
2. 试剂R1,48 ml,含显色剂
3. 试剂R2,12 ml,含酶
试剂常温运输。到达后所有试剂均-20 ºC长期冻存,或避光4 ºC保存6月。混合的工作液4ºC稳定1个月。
所需设备:(721型)可见光分光光度计、酶标仪、自动或半自动生化分析仪。最佳工作波长550-555nm,如仪器无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
配制工作溶液:按4:1比例,取8 ml试剂R1,与2 ml试剂R2混合得到10 ml 工作溶液。当天使用或4ºC保存1周。
标准品稀释:10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽,通常设置黑体标记的4管即可,不需要设置> 2~10mM的标准管,以此得到的标准曲线用来>2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。
测定操作:
1.参见下表加样。先加标准品或待测样品,后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。2.37ºC 20min (15~30min)。或25ºC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
3.先用蒸馏水空白管调零,然后测定各管OD550或570nm值。
4.绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
5.如果仅用单一标准管:葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品OD-空白OD) / (标准管OD-空白管OD)。
加样与测定表(可微量调整样品与工作液体积比例)
微板测试,反应体积200μl | 比色杯测试,反应体积800 μl | ||||||
空白管 | 标准管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 | 测定管 | ||
蒸馏水μl | 5 | 蒸馏水μl | 20 | ||||
标准品μl | 5 | 标准品μl | 20 | ||||
标品 μl | 5 | 标品 μl | 20 | ||||
工作溶液μl | 195 | 195 | 195 | 工作溶液μl | 780 | 780 | 780 |
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