货号: | MJ-1554 |
生长状态: | 良好 |
年限: | 永久 |
运输方式: | 常温/快递 |
器官来源: | 见名称 |
细胞形态: | 正常 |
免疫类型: | 文献 |
物种来源: | 人 |
相关疾病: | 咨询客服 |
组织来源: | Human |
品系: | ATCC |
细胞类型: | 说明书 |
数量: | 1X10^6 cells |
规格: | T25 |
12、受试物的浓度和水溶性问题:
问:向大家请教受试物的问题:
(1)我采用是大鼠睾丸支持细胞,染毒的物质是有机磷农药,不溶于水。请问应采用什么样的有机溶剂作为溶剂,要注意什么?
(2)如何确定有机磷农药的染毒浓度?
答:可以试试DMSO,千分之一体积,不会影响细胞。eg.需要10uM的药液,用DMSO将药配成10mM的储备液,用的时候1000倍稀释。
13、血液中提取单核细胞后的保存问题:
问:我的实验是用流式细胞仪检测单核细胞上一个蛋白通道的表达量,由于血液标本条件的限制,每日收集标本量较少且时间分布无法确定,苦于没有单核细胞的保存方法就需要每日处理,请问有可以保存血液样本中提取出来的单核细胞,并且对细胞上表达的蛋白量影响较少的方法吗?
答:可以试下冻存,我曾经冻存过CD14+细胞和间充质干细胞3个月左右,然后拿出来又上流式检测,除了复苏过程中会有少量细胞死去,不影响测相关表型。但是不知道冻存对于你要检测的蛋白有无影响,可以把冻存后复苏细胞和非冻存细胞分两组,上次流式加以比较,或者检索有无相关文献中这样操作。
14、MTT结果的问题:
问:最近我做了Hp作用GES后MTT,光镜下见未加Hp上清液组贴壁细胞明显多余其它各组,但是OD值却较小,请问这是什么原因呢?我加了MTT后,大概作用了3个半小时,是不是作用时间短了呢?
答:可能原因:(1)Hp上清与MTT反应影响了结果;(2)Hp上清在570nm吸光度有OD值。请做只加Hp上清的对照看看。
15、心肌细胞培养液浓度问题:
问:我想让心肌细胞长的快点,用20%小牛血清的IMDM培养液,请问会不会抑制心肌细胞的生长?
答:肯定会。
16、原代培养人卵巢颗粒细胞做转染的问题:
问:我正在原代培养颗粒细胞预对其进行基因转染,请问战友们有没有类似经验. 我的问题是:(1)细胞养的状态不好;(2)钓取基因PCR无结果;(3)目前还没做到转染这步。即使基因顺利从细胞或组织中钓出,我也担心细胞状态不行,没等转染就死了,实验无法继续,请多给意见。
答:原代的可以转的,你用的是脂质体么?推荐lipofetamin LTX或者R&D的Fegene,对细胞毒性温和一些。
17、内皮细胞原代的培养问题:
问:我养的不知道是不是内皮细胞,细胞好象比其他细胞小很多,而且似乎在血管里没爬出来,为什么?我用0.1%的白蛋白胶原酶37度消化30分,是不是消化不够.而且,内皮细胞原则上讲是应该灭活血清的,但考虑以下,觉得37度下补体可能就消除了,故用未灭活的20%FBS,这里是不是要求严格彻底灭活啊?生长因子我买了,但没用,考虑,即使不加因子,起码也该有细胞,只是长的好坏的问题,现在好象全军覆没哎,问题到底出在哪?请各位师兄师姐帮帮忙了,好郁闷啊,这两天都食不知味了,也许细胞养成养不成不好说,减肥是肯定会有成果的。
答:内皮细胞本来就很难养,刚刚长出来时和成纤维细胞差不多,胞体比成纤维细胞大,有突起。不知道是不是你消化的时间不够,血清是一定要灭活的,刚开始养建议加生长因子,等你养熟了再撤去生长因子。不要灰心,多试几次。
18、关于流式的问题:
问:我在做药物抑制肿瘤细胞方面的实验,在做流式的时候开始我是用MTT的细胞密度和铺板时间来决定加药时间,48小时候检测,结果高浓度组总是收不够细胞。请问大家再作相关实验的时候,大概让细胞长到多满的时候开始加药?
答:作流式最好用六空板作,种板时细胞数目不要少于1*106,24小时细胞贴壁后再加药,48小时候检测才能保证作流式时的细胞数量。另外,作流式和做MTT药量不是简单的换算关系,要根据预实验结果来进行。
19、Rhodamine 123会和羧酸物质反应显色吗?
问:离心收集经羧酸类物质暴露后的细胞,加入Rhodamine染色后,生成红色物质,是因为Rhodamine 与细胞或EP管内残留的羧酸物质发生反应了吗,此外,Rhodamine 还可能会和什么物质反应呢?如果发生反应了,结果还能用吗,有一组样品的流式检测结果随剂量有一定的趋势,这样的结果可用吗,能解释吗?
答:最好将Rhodamine 123和含羧酸物质如Fluo-3两种荧光试剂分别检测,因反应条件差别较大,结果影响较大,不能说明问题。
20、细胞毒实验的溶媒问题:
问:现在要做几个生物碱对一种细胞作用的实验,突然发现有几个生物碱不溶于DMSO,水和PBS,请问还有什么溶媒,或者还有什么方式来进行实验?
答:用丙二醇试试吧。
更多相关技术问题请联系@我!!
上海名劲生物科技有限公司 | 公司账户:上海名劲生物科技有限公司 |
联系人:刘鹏13764978708 | 开户银行:招商银行上海闵行支行 |
企业QQ:1463049905 | 账号:121918863910601 |
订购邮箱:Sh@mjswkj.cn | 社会信用代码:91310120MA1HK7KBXU |
网址:www.mjswkj.cn | 执照证件编号:26000000201512040070 |