货号: | KOD-101 |
数量: | 大量 |
保存条件: | -20度 |
供应商: | 东洋纺 |
规格: | 250u |
东洋纺的聚合酶,货号是KOD-101. 品名KOD DNA Polymerase 每支250u. 特价销售,数量不多,欲购从速!
本酶是从日本鹿儿岛县小宝岛的含硫气孔中分离出来的超嗜热原始菌
Thermococcus kodakaraensis KOD1 株的 DNA多聚酶。具有强力 3 →5
核酸外切酶活性( 校正活性),保真性高于 Taq DNA多聚酶约 50 倍。
■特 征
●具备超群的保真性
KOD DNA Polymerase 的特点是具有强力的3→5核酸外切酶活性,故与Taq DNA
多聚酶相比,PCR 反应的保真性约是后者的 50 倍左右,是对 PCR 产物进行克隆时
的最佳选择。
●快速的 DNA 合成速度
KOD DNA Polymerase具有约2倍于Taq DNA 多聚酶、6倍于Pfu DNA多聚酶的
合成速度,在PCR酶中反应最快。
●优良的耐热性
耐热性比Taq DNA多聚酶要好,在100℃、 1小时的热处理后仍可保持约70%的活性。
故根据需要可以将热变性步骤的温度设定值提得更高,这对处理 GC 含量高的模板
等具有特异性高级结构的样品非常有利。
■用 途
● PCR
● DNA 片段的平滑化
■说 明
本酶是高效率、高成功率 PCR 酶 KOD FX 系列与高保真性 PCR 酶 KOD -Plus- 系列
的基础酶。本酶的最适添加量为 2.5U/ 反应,短片段可在短时间(1kb/30sec.)完成高保
真性的扩增。另外,对于KOD -Plus-、KOD FX 等长片段高成功率的PCR酶最适添加
量为1U/反应,延伸时间的设定同Taq酶1kb/1min.。
■几点建议
● PCR产物的克隆
本酶的 PCR 产物可以通过平滑末端克隆法进行克隆。此时若载体已进行了脱***酸化
处理,则可对PCR产物进行***酸化处理,或者采用带5 ***酸基的引物。
● PCR条件的设定
延伸步骤对每 1kb 目标物的标准反应时间为 30sec.。延伸反应时间过长,有时会产
生拖尾效应。如果出现拖尾效应,则可缩短延伸反应的时间,或减少酶量。由于本
酶的耐热性较高,在应用于 GC 含量高的模板等以及较易产生高级结构的模板时,
可在96℃以上温度下进行变性反应。
●引物的设计
本酶具有 3→5 核酸外切酶的活性,建议将引物设计得比使用 Taq DNA 多聚酶时的
要相对长一些为佳。使用高Tm值的引物时,可以进行2步骤的简易PCR反应。另外,
采用3侧有错配碱基的引物时,通过本酶有时会得到修正。
●添附的缓冲液
本酶添附有两种缓冲液。一般情况下使用的是#1缓冲液。目标物长度为4kb以上时,
或用#1缓冲液发生拖尾效应时,则请改用#2缓冲液。
●长片段 PCR
本酶不适合于长片段PCR。长片段PCR反应时建议使用KOD Dash