货号: | NRPC07B、NRPC07C |
宿主: | 豚鼠,鸡,绵羊,仓鼠,人,猴,兔,山羊,大鼠,小鼠,其它 |
数量: | 大量 |
级别: | 制药试剂 |
保存条件: | -20 ℃保存 |
应用范围: | 亲和纯化 |
适应物种: | 豚鼠,鸡,猫,马,猪,其他灵长类,人,兔,羊,大鼠,小鼠 |
抗体英文名: | Recombinant Protein G Conjugated to NUPharose Resin |
抗原来源: | 大肠杆菌 |
供应商: | 杭州纽龙生物科技有限公司 |
克隆性: | 是 |
规格: | ml,5 ml,50 ml,100 ml,1L,5L |
品 名 | 重组蛋白G 琼脂糖凝胶FF |
英文名 | Recombinant Protein G NUPharose Fast Flow, rProtein G NUPharose FF |
目录号 | NRPB02L、NRPB02S(预装柱) |
规 格 | 20 ml,100 ml,1 L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,10 ml预装柱,特殊规格订制 |
运 输 | 2 ~ 25℃,常压、避光 |
贮 存 | 20%乙醇,2 ~ 8℃ |
保质期 | 3年 |
相关介绍:
链球菌G蛋白(Streptococcus Protein G 简称SPG)是G、C型链球菌细胞壁中的一种蛋白质,能特异性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段结合而不影响其Fab段与抗原分子结合的能力,其亲和填料可以用于从血清、腹水、组织培养物等上清中结合吸附并纯化免疫球蛋白(抗体)。
技术指标:
基质 | 4%高度交联琼脂糖凝胶 |
配基 | 重组蛋白G |
配基密度 | ≥6 mg/ml |
填料粒径 | 60 ~ 180 μm |
最大流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 20 ~ 100 cm/h |
工作(清洗)pH值 | 2 ~ 9(2 ~ 10) |
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥40 mg/ml IgG |
抗体与蛋白A、蛋白G的结合力:
种类 Species | 亚型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
马 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
猪Pig | IgG | +++ | + |
狗Dog | IgG | +++ | + |
鸡Chicken | IgY | - | - |
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸盐缓冲液(PB),pH 7.4
洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸-盐酸缓冲液,pH 2.7
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0
- 1 ml重组蛋白G琼脂糖凝胶预填柱,用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;
- 用结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;
- 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释至50 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;
- 用结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积至基线;
- 用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;
- 每次使用后再用3 ~ 5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗;
- SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
- 预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
- 样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
- 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。
- 通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M甘氨酸-盐酸缓冲液(pH 2.0 ~ 2.7)洗3 ~ 5个柱体积,然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上,作简易再生。
- 使用数次后应进行在位清洗,建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上;或70%乙醇洗5个柱体积以上(可保持4 ~ 6 h),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类,恢复柱子的载量和流速。
推荐流速 | |||
预装柱体积 | 1 ml | 5 ml | 10 ml |
流速(ml /min ) | 0.2 | 1 | 2 |