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双膜气柜--原理剖析
Calphostin C ( 121263-19-2)
Afatinib (BIBW2992),CAS:439081-18-2
通过浦东新区市场监管局认证 
Cyanine5.5 NHS ester
EZ Mark彩色预染蛋白
Quick Cell TUNEL细胞
EZ Mark 100-5000bp D
Cyanine3 Maleimide(
6-HEX, SE
LyGreen (20×in wate| 货号： | D3030L1262 |
| 供应商： | 李记生物 |
| 数量： | 50 |
| 保质期： | 质保期大于12个月 |
| 保存条件： | 4℃ |
| 规格： | 100 mL |
产品描述
《EZ ECL Pico化学发光液》是一款增强型化学发光(ECL)HRP底物，可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现低皮克级的蛋白检测(<10-12g)，极其节省抗体。本产品一抗浓度范围0.2-0.1μg/ml（以1 µg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍）；二抗浓度10-50ng/ml（以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍）。
EZ Pico底物，为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供了明亮的信号、低至皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。
EZ Pico底物的特点：
• ECL — 用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物
• 低至皮克级灵敏度 — 检测硝化纤维素膜或PVDF膜上皮克级的蛋白条带
• 长信号持续时间 — 在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6至8小时的可检测光信号
• 稳定试剂 — 工作液在24小时内保持稳定；试剂盒在室温下可稳定放置长达1年
• 价格经济 — 针对稀释的抗体浓度条件进行了优化：
本产品优于SuperSignal™ West Pico Chemiluminescent Substrate，West Pico为Thermo Fisher公司产品（CAT:34077-34080）
运输与保存方法
室温运输，4℃避光保存，质保期大于12个月。
产品组分
| 组分名称 | 产品货号规格及组分 | |
| D3030L1262（100ml） | D3030L1263（500ml） | |
| A液 | 50ml | 250ml |
| B液 | 50ml | 250ml |
使用方法
1. 按常规方法执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。
注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。将一抗浓度稀释到0.2～1ug/ml，将二抗浓度稀释到10～50ng/mL（最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量）。
2. 新鲜配制发光工作液：根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀，备用。
注: 1) 短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液，但为获得最佳结果，将此工作液保存在棕色瓶中，避免暴露于任何强光。
2) 取A液和B液一定要用不同的枪头，工作液现配现用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上（推荐100μl发光液/cm2膜），使之充分接触。室温孵育5分钟，准备立即压片曝光。
4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不可让膜完全干燥。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6. 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60秒。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5-30分钟期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如底物孵育较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备（如Bio-Rad的分子成像仪系统）或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。
注意：胶片与膜之间的任何相对移动，可能在胶片上造成人为的非特异信号。
7. 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强，则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。
常见问题及解决方案
| 问题 | 可能问题 | 解决方案 |
| 胶片反转像（即黑色背景，白色带） | 系统中HRP过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
| 膜上有褐色或黄色带 | ||
| 印记在暗室中发光 | ||
| 信号持续时间少于8小时 | ||
| 信号弱或无信号 | 系统中过多的HRP耗尽了底物并导致信号迅速衰减 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
| 抗原或抗体的量不足 | 增加抗体或抗原的量 | |
| 蛋白质转移率低 | 优化转印 | |
| HRP或底物活性低 | 见下文注释 | |
| 高背景 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
| 封闭不充分 | 优化封闭条件 | |
| 封闭式机不合适 | 尝试一种不同的封闭试剂 | |
| 洗涤不充分 | 增加洗涤时间、次数或洗涤缓冲液体积 | |
| 胶片过度曝光 | 缩短曝光时间或使用背景消除剂 | |
| 抗原或抗体的浓度太高 | 减少抗体或抗原的量 | |
| 蛋白质条内有斑点 | 蛋白质转膜效率低 | 优化转印流程 |
| 膜的水化不均匀 | 按照制造商建议适度的使膜水化 | |
| 胶片与膜之间存在气泡 | 在胶片曝光前，去除气泡 | |
| 胶片上背景有斑点 | HRP标记二抗中存在聚集物 | 使用0.2um的过滤器 |
| 非特异性条带 | 系统中HRP过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍。 |
| SDS导致的蛋白非特异性结合 | 在检测过程中不使用SDS |
检测系统有效性（如需要）：在暗室中，在一个清洁试管中加入将1-2ml底物工作液。关闭灯，添加1ul未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光，蓝光信号在随后的几分钟渐淡。
注意事项
（1）步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
（2）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
（3）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
（4）由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
（5）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
（6）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
（7）NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。
