货号: | GST融合蛋白纯化柱(凝胶) |
数量: | 大量 |
规格: | 1ml |
GST-resin 使用说明书 一、简介: GST-resin 纯化柱系采用进口填料分装而成,性质稳定,重复性好,使用简单、方便。胶粒平均直径60微米,比表面积大,结合大肠杆菌重组GST蛋白的能力大于8 mg/ml。可以满足大多数实验室级别小量纯化GST融合蛋白的需求。 二、使用方法: 1. 离心收集250 ml表达目标蛋白的大肠杆菌,冻融或超声破菌于10-15 ml破菌缓冲液。破菌缓冲液: 20-50 mM Tris-HCl,pH 7.5-8.5,含0.25 M NaCl,其它常用缓冲液为PBS。这一步可以适当加入EDTA,PMSF等蛋白酶抑制剂。 2. 离心取上清,上样于预先平衡好的纯化柱,通常自然流速可以很好结合。少数情况下,流速过慢,可以使用硅胶管控制上样速度。 3. 样品上完以后,使用破菌缓冲液洗柱10-20个柱体积,注意将纯化柱侧壁上的残留样品洗干净。 4. 使用2-4 ml洗脱缓冲液将样品从GST-resin纯化柱上洗脱。洗脱缓冲液:破菌缓冲液中补加新配制还原型谷胱甘肽(GSH)到终浓度6 mM,10 mg GSH干粉可配制5 ml洗脱缓冲液。 5. 纯化结束以后,使用20倍柱体积1% 醋酸冲洗纯化柱,再使用PBS/TBS平衡pH,大量纯水洗柱,最后加入5 ml 20%乙醇,保存在4 ℃,不要在-20 ℃冻结,仔细保存可以让一根柱子反复使用。 |