点击图片查看原图
LOW MULTIPLATE-96,WHITE 25/BX
BAC/PAC大型质粒提取试剂盒
Water Filters (0.45 |jm)
通过海淀分局认证 
| 货号： | NR0003 |
| 保存条件： | 4℃ 避光 |
| 供应商： | LEAGENE |
| 英文名： | Trizol Reagent |
| 保质期： | 12个月 |
| 规格： | 50ml/100ml |
产品简介：
Lezol是一种Leagene自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA提取试剂。Lezol采用与Invitrogen TRIzol完全相似的原理和方法，Lezol颜色、抽提的方法和步骤亦与Invitrogen TRIzol完全相同。Lezol含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
Leagene适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100 mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。Lezol具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。
产品组成：
| 编号 名称 | NR0002 | NR0002 | Storage |
| Lezol Reagent | 50ml | 100ml | 4℃ 避光 |
| 使用说明书 | 1份 | ||
自备材料：
1、试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。
2、耗材： RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase是导致RNA降解的最主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase，移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。
3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱。
操作步骤(仅供参考)：
1、 样品准备
① 贴壁细胞：
① 接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Lezol裂解细胞，每10cm2面积加1ml Lezol，用移液器吹打混匀。
②胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000～6000g离心5 min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA收获率。
⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000 g离心5 min，收集细胞。每5×106～107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Lezol。
⑶组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Lezol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Lezol体积的10%。研磨要迅速，以1min为佳。
⑷血液：取0.5～1 ml新鲜或冻存的血液，12000g离心5 min，去除血浆，加入1ml Lezol，充分振荡混匀。
2、 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10 min后，充分振荡，反复1～3次)，将裂解样品或匀浆液室温放置5～10 min，使核蛋白与核酸完全分离。
3、 样品分层：加入0.2 ml氯仿/1ml Lezol，剧烈振荡15 s，室温放置2～3 min。置于4℃离心机，12000 g离心10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。
4、 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积Leagene Trizol专用RNA沉淀液，超低温冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室温放置15～20 min。12000 g 4℃离心10 min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。
5、 洗涤RNA：加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Lezol洗涤沉淀(或者加入1ml Leagene Trizol专用RNA洗涤液，可以大大提高RNA纯度），室温放置5～10 min，7500g 4℃离心5 min，弃上清。室温干燥5～10 min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。
6、 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品，沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。
分析与定量：
- 测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8～2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
- 进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。
- 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。
注意事项：
1、 样品保存：加入Lezol混匀后，样品可在-70℃放置1～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。
- Lezol是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
- Lezol可常温运输，建议保存4℃保存。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
常见问题分析：
| 常见问题 | 可能原因 |
| A260/ A280＜1.6 | 抽提得到的RNA沉淀未完全溶解。 |
| 水相中混有有机相，从而存在蛋白质和DNA污染。 | |
| RNA样品用水而不是TE溶解。低离子浓度和低pH条件下，A280值会偏高。 | |
| 样品匀浆时加的Lezol试剂太少，RNA与蛋白质、DNA未能完全分离。 | |
| 匀浆后样品未在室温放置或者放置时间太短，RNA与核蛋白未完全解离。 | |
| DNA污染 | 样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液，致水相减少或pH升高。 |
| 样品匀浆时加入的试剂体积太少。如果存在DNA污染，可用DNA清除剂去除。 | |
| 水相中混有有机相，从而存在蛋白质和DNA污染。 | |
| RNA产量低 | 样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA没有被完全释放出来。 |
| 得到的RNA沉淀未完全溶解。 | |
| 抽提的RNA中含有RNase。 | |
| RNA降解 | 组织或细胞不新鲜，样品没有及时被液氮冻存，导致组织或细胞中的RNA降解。 |
| 溶液或离心管未经RNase free处理，RNase的污染导致RNA被降解。 | |
| 细胞在胰蛋白酶消化时间过长，导致未加Lezol前RNA已经部分降解。 | |
| 电泳时使用的甲酰胺pH小于3.5，导致RNA发生酸解。 | |
| 蛋白和多糖污染 | 水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA。 |
| 样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解完全。 |
相关产品：
| 产品编号 | 产品名称 | 产品编号 | 产品名称 |
| CA0075 | 青霉素-链霉素混合溶液(100×) | DM0015 | 标准革兰氏染色液 |
| CC0005 | 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) | DZ0040 | 改良苯酚品红染色液 |
| CC0023 | D-Hanks平衡盐溶液(1×,无酚红) | DZ0189 | 戊二醛固定液(电镜专用,2.5%) |
| CC0130 | 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%) | NA0030 | Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE) |
| CS0001 | ACK红细胞裂解液 | NR0001 | DEPC处理水(0.1%) |
| DA0001 | DAPI染色液(5ug/ml) | NR0040 | RNase A(10mg/ml) |
| DA0065 | 台盼蓝染色液(0.4%) | OR0001 | pH标准缓冲溶液(pH=4.00) |
| DA0057 | 甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法) | PE0018 | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 |
| DB0082 | 改良番红O-固绿软骨染色液 | PE0080 | Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH6.8) |
| DC0032 | Masson三色染色液 | PE0103 | 丙烯酰胺溶液Acr-Bis(30%,29:1) |
| DC0041 | 天狼星红染色液 | PI0011 | (PMSF,100mM) |
| DD0002 | EDTA脱钙液 | PS0013 | RIPA裂解液(强) |
| DE0001 | 碱性磷酸酶染色液(钙钴法) | PT0001 | BCA蛋白定量试剂盒 |
| DF0111 | 中性福尔马林固定液(10%) | PT0013 | 考马斯亮蓝快速染色液 |
| DG0005 | 糖原PAS染色液 | PW0040 | Western blot一抗稀释液 |
| DH0006 | 苏木素伊红(HE)染色液 | PW0060 | 通用显影液 |
| DJ0001 | 普鲁士蓝染色液(核固红法) | PW0082 | 丽春红S染色液(1×Ponceau S) |
| DK0022 | 尼氏染色液(焦油紫法) | R00038 | IPTG(50mg/ml) |
| DL0005 | 苏丹Ⅲ脂肪染色液 | R00300 | x-gal(20mg/ml) |
| DM0002 | 姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9) | NE0056 | 乙酸钠溶液(3M,pH5.2,RNase free) |
温馨提示：不可用于临床治疗。
