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Wizard® Plus Minipreps DNA Purific
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽
FastDigest™ Restriction Enzymes
通过房山分局认证 
M-MLV逆转录酶（RNase| 货号： | JLEM004 |
| 保质期： | 1年 |
| 保存条件： | -20℃ |
| 规格： | 100T(50ul体系） |
本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行RT-PCR 检测。用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使逆转录及PCR过程在单管中完成，比分开进行逆转录及PCR更方便。由于不需要在逆转录完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格
100人份（50μl体系）
适用仪器
适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成
| 1 | 2 ×RT-PCR 反应缓冲液 | 2600μl |
| 2 | 酶混合液 | 200μl |
根据下表配制反应液：
| 试剂名称 | 浓度 | 荧光PCR用量 | 普通PCR用量 | |
| 1 | 无RNA酶的水 | - | 22.3-X μl | 22.9-X μl |
| 2 | 2 ×RT-PCR 反应缓冲液 | - | 25 μl | 25 μl |
| 4 | 引物 1 | 20 μM | 0.5 μl | 0.5 μl |
| 5 | 引物 2（reverse） | 20 μM | 0.6 μl | 0.6 μl |
| 6 | Taqman荧光探针 | 20 μM | 0.6 μl | - |
| 7 | 酶混合液 | - | 1 μl | 1 μl |
| 7 | RNA模板 | - | X μl | X μl |
PCR扩增
将配制好的反应体系混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
扩增程序：
| 温度 | 时间 | 循环数 | |
| 1 | 50℃ | 10-30分钟 | 1 |
| 2 | 94℃ | 5分钟 | 1 |
| 3 | 94℃ | 30 秒 | 40 |
| 50-60℃ | 30 秒 | ||
| 72℃ | 1kb/60 秒 | ||
| 4 | 72℃ | 10分钟 | 1 |
| 5 | 4℃ | 保温 | |
扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期
-20℃保存，有效期为12个月。
注意事项
1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 如一次不能用完，请按用量分装保存，应尽量避免反复冻融。
温馨提示：不可用于临床治疗。
