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微量琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒

产品价格: ¥290.00

最小起订量:暂无 可售数量:999盒

发货时限:
暂无
所在地区:
中国北京
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-05-31 01:30:04
浏览次数:
65

产品详情

品牌名称:
DORUN
货号: DY6256
供应商: 德元国际
数量: 10
规格: 50T
微量琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 
MicroGel Extraction Kit
离心柱式
Cat No:DY6256
Kit Size:50T
                 
                 
                 
产品组分              
    组分 Contents     50preps    
    Buffer 1#     50ml    
    Buffer 2#     15ml    
    Buffer (concentrate) 3#   10ml    
    Buffer 4#     10ml    
    吸附柱       50    
    收集管       50    
                 
                 
                 
储运条件              
  本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输。
                 
说    明              
  本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。    
                 
产品简介              
     本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量 DNA 片段,溶胶速度快,并利用硅基质膜技术,以非常小的终洗脱体积(可少至 10 μl),从琼脂糖凝胶中,快速纯化 50bp-50kb 的 DNA 片段,纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,从而可获得高纯度、高浓度,完整性好的 DNA,回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。
实验前准备及注意事项            
  1.本实验需要无水乙醇、异丙醇、离心管请自备。      
  2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果。 
  3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。 
  4..使用前请检查Buffer 1#是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
  4.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer 3#中加入无水乙醇。
  5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。 
  6.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤  
  1. 将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称取重量。 
  注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。 
  2. 向胶块中加入3倍体积Buffer 1#;当琼脂糖凝胶浓度>2%时,建议使用6倍体积Buffer 1#(如凝胶重为100 mg,其体积可视为100 μl,依此类推)。 
  3. 50℃孵育10min,其间每隔2-3min温和地上下颠倒离心管,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟,直至胶块完全溶解。 
  注意:1)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合 DNA 的能力较弱。 
        2)在胶充分溶解后检测 pH 值,若 pH 值大于 7.5,可向含有 DNA 的胶溶液中加 10-30 μl 的 3 M 醋酸钠(pH 5.0)将pH 值调到 5-7。 
  4. 加入1倍胶体积异丙醇,上下颠倒混匀(如凝胶为100mg,则加入100μl异丙醇)。
  5. 柱平衡:向吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中加入200 μl Buffer 2#,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  6. 将步骤4所得溶液加入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,室温放置2min,12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。 
  注意:吸附柱容积为700 μl,若样品体积大于700 μl 可分批加入。 
  7. 吸附柱中加入500 μl Buffer 1#,12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
  8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer 3#(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
  注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer 3#静置2-5min再离心。 
  9. 12,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 
  注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 
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10. 将吸附柱放到一个新的离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加10 μl Buffer 4#(pH 8.5),室温放置2min。12,000 rpm离心1min,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 
注意:1) 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。 
      2) 为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重复步骤10。 
      3) 洗脱体积不应小于10 μl,体积过少会影响回收效率。 
      4) 如果使用TE洗脱,需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。 
      5) 回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer 4#应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。 
5)回收大于10kb的DNA片段时,Buffer 4#应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。   
温馨提示:不可用于临床治疗。

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