点击图片查看原图

细菌细胞总RNA 提取试剂盒 (DNase I)

产品价格: ¥1260.00

最小起订量:暂无 可售数量:999盒

发货时限:
暂无
所在地区:
中国北京
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-05-28 01:30:05
浏览次数:
191

产品详情

品牌名称:
DORUN
货号: DY6179A
供应商: 德元国际
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: 常温
规格: 50T
细菌细胞总RNA 提取试剂盒 (DNase I) 
RNApure Bacteria Kit(DNase I) 
离心柱式
Cat No:DY6179A
Kit Size:50T
                 
                 
产品组分              
    组分 Contents     50preps    
    DNase I       1000 U     
    10×Reaction Buffer   1000 μl    
    Buffer 1#     35ml    
    Buffer 2#     40ml    
    Buffer(concentrate) 3#   11ml    
    Buffer 4#     10ml    
    过滤柱       50    
    离心管       50    
    吸附柱       50    
    收集管       100    
                 
储运条件              
  本试剂盒室温15℃-25℃条件下运输,室温15℃-25℃的干燥条件保存。
说    明              
  本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。    
产品简介              
     本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总 RNA,30-40 min即可完成反应。提取的总 RNA 纯度高,没有蛋白质和其他污染,如果是对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验,残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的 RNA 适用于 RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。 
实验前准备及注意事项            
  1. 本实验需要无水乙醇、Lysozyme(DY5018)、TE缓冲液、β-巯基乙醇,请自备。
  2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10min,用水彻底冲洗后高压灭菌。 
  3. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
  4.配制溶液应使用无RNase的水。 
  5. 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套
  6. 提取的样品避免反复冻融,否则影响 RNA 提取的量和质量
  7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer 3# 中加入无水乙醇。
  8. 使用前请检查 Buffer 1# 是否出现结晶或者沉淀,可置于 56℃水浴重新溶解。Buffer 1# 在使用前请加入β-巯基乙醇,至终浓度为 1%。如 1 ml Buffer 1# 加 10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的 Buffer 1# 室温可保存 1 个月。 
  9.所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤  
  1. 4℃ 10,000 rpm(~13,400×g)离心2min收集菌体(菌体量最大不超过1×109),小心去除所有上清。 
  注意:上清如果有残留,会影响后续的消化过程。 
  2. 用含有Lysozyme的100 μl TE缓冲液彻底重悬菌体,室温孵育。具体配方和孵育时间如下:
   
                TE 缓冲液中 Lysozyme 的终浓度     孵育时间  
       G-细菌            400 μg/ml               3-5 min  
       G+细菌             3 mg/ml                  5-10 min   
   
  3. 加入350 μl Buffer 1#(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇),涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)。将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中,10,000 rpm离心2min,收集滤液,弃掉过滤柱。 
  4. 向上步得到的滤液中加入250 μl无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入到吸附柱(吸附柱应预先装入收集管中)中,10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  5. 向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#,10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  6. 配制DNase I 混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8 μl 10 × Reaction Buffer 和20 μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80 μl的反应液。
 注意: 以上体系为按照我公司产品DNase I (Cat No:DY6060)反应体系进行配置,应用其他公司产品请参考相应说明书。 
  7. 向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液,20-30℃孵育15min。 
  8. 向吸附柱中加入350 μl Buffer 2#, 10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  9. 向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#(使用前检查是否加入无水乙醇), 10,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 
  10. 重复步骤6。 
  11. 12,000 rpm 离心 2 min,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 
   注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。 
  12. 将吸附柱置于一个新的无RNase的离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50 μl Buffer 4#室温放置1min,10,000 rpm离心1min,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。 
,防止降解。 
  注意:1) Buffer 4# 体积不应小于 30 μl,体积过小影响回收率。 
        2) 如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的Buffer 4#重复步骤12。 
        3) 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。 
                 
温馨提示:不可用于临床治疗。

免责声明

本网页所展示的有关【细菌细胞总RNA 提取试剂盒 (DNase I)】的信息/图片/参数等由的会员【北京德元国际科技有限公司 】提供,由【生物实验采购网】会员【北京德元国际科技有限公司 】自行对信息/图片/参数等的真实性、准确性和合法性负责,本平台(本网站)仅提供展示服务,请谨慎交易,因交易而产生的法 律关系及法律纠纷由您自行协商解决,本平台(本网站)对此不承担任何责任。您在本网页可以浏览【细菌细胞总RNA 提取试剂盒 (DNase I)】有关的信息/图片/价格等及提供 【细菌细胞总RNA 提取试剂盒 (DNase I)】的商家公司简介、联系方式等信息。

在您的合法权益受到侵害时,请您致电,我们将竭诚为您服务,感谢您对【生物实验采购网】的关注与支持!

网站首页 | 关于我们 | 联系方式 | 使用协议 | 版权隐私 | 网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  网站留言  |  RSS订阅  |  违规举报
 
免责声明:本站有部分内容来自互联网,如无意中侵犯了某个媒体 、公司 、企业或个人等的知识产权,请来电或致函告之,本网站将在规定时间内给予删除等相关处理。