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动物组织总RNA提取试剂盒（DNase I）

产品价格: ￥1360.00

最小起订量：暂无 可售数量：999盒

发货时限：
暂无
所在地区：
中国北京
有效期至：
长期有效
最后更新：
2021-05-27 01:30:02
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产品详情

品牌名称：
DORUN
货号： DY6173A
供应商： 德元国际
数量： 大量
规格： 50T
动物组织总RNA提取试剂盒（DNase I） 
RNApure Tissue Kit（DNase I） 
Cat No：DY6173A
     Kit Size:50T  
                 
                 
产品组分              
    组分 Contents 　 　 50T    
    DNaseI 　 　 　 1000U    
    10×ReactionBuffer 　 1000 μl    
    Buffer 1 # 　 　 35ml    
    Buffer 2 # 　 　 40ml    
    Buffer 3 #（concentrate） 　 11ml    
    Buffer 4 # 　 　 10ml    
    吸附柱 　 　 　 50个    
    收集管 　 　 　 50个    
    离心管 　 　 　 50个    
                 
                 
                 
储运条件              
      DNaseI、10×ReactionBuffer保存在-20℃，其余组分室温（15-25℃）干燥条件下保存。保质期一年
说    明              
   本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。    
产品简介              
     本试剂盒将高效的异硫氰酸胍裂解技术与硅基质膜纯化技术相结合，可从
动物细胞及组织中高效提取总 RNA。提取样本一般最多 30 mg 组织或 1 x 107 细胞。
   本试剂盒可回收未完全纯化的 RNA、体外转录和酶促反应后得到的 RNA。
   本试剂盒也可提取纯化分子量大于 200 碱基的高品质 RNA，几乎无DNA 残
留。如果要进行对微量 DNA 非常敏感的 RNA 实验，残留的 DNA 可利用无 RNase 的 DNase I 在柱上进行消化去除。提取的 RNA 可用于 RT-PCR、Nothern Blot、Dot Blot等下游实验。 
实验前准备及注意事项            
  1. 本实验需要无水乙醇、β-巯基乙醇等请自备。      
  2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。  
  3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸
   泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。
  4. 配制溶液应使用无RNase的水。        
  5. 提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取得率和质量。  
  6. 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer 3 #中加入无水乙醇。
  7. 使用前请检查 Buffer 1#是否出现结晶或者沉淀，可置于 56℃加热重新
   溶液。Buffer 1#在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为 1%。如 1ml
   Buffer 1# 加 10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的 Buffer 1# 室温
   可保存 1 个月。
  8. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。
                 
操作步骤              
  1. 样品处理
   1）组织：将组织在液氮中磨碎。每20-30 mg组织加600 μl Buffer 1#使用
      前检查是否加入β-巯基乙醇），组织样本少于20 mg加350 μl Buffer 
      1#。样品体积不超过Buffer 1#体积的十分之一。 
     2）单层培养细胞：将细胞在培养瓶中直接裂解或处理成细胞悬液，离心得 
      到细胞沉淀，弃上清，每6-10 cm2 培养面积加入600 μl Buffer1#，
      小于6 cm2加入350 μl Buffer 1#，反复吹打几次，使其充分裂解。 
     3）细胞悬液：12,000 rpm（～13,400×g）离心1min弃上清，得到细胞沉
      淀。每5×106-1×107细胞加入600 μl Buffer 1#，少于5×106细胞加
      入350 μl Buffer 1#，反复吹打几次，使其充分裂解。
   注意：(1）尽量除尽细胞培养基，细胞培养基可能抑制细胞的裂解影响RNA
            产量。
         (2）尽量使细胞充分悬浮并充分裂解，否则影响RNA产量。
  2. 样品充分裂解后，室温放置5min，使蛋白核酸复合物完全分离。
  3. 12000rpm离心2-5min，取上清进行下步操作。 
  4. 加入1倍体积（600 μl或350 μl）的70%乙醇（无RNase水配制），混匀。
  注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。   
  5. 将上步所得溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若
   一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rmp离心1min,倒掉收集管中的溶
   液，将吸附柱重新装入收集管中。
 注意：吸附柱的最大载量为100 µg不要超载，否则会影响RNA的产量和纯度。
  6. 向吸附柱中加入350 μlBuffer2#，10,000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  7. 配制DNase I 混合液：取52 μl Buffer 4 #，向其 中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I（1 U/μl），混匀,配制成终体积为80 μl 的DNase I混合液。 
  8. 向吸附柱中直接加入80µlDNaseI 混合液，20-30℃孵育15min。
  9. 向吸附柱中加入350 μlBuffer2#，10,000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  10.   向吸附柱中加入500 μl Buffer 3#（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 
  11. 重复步骤10。 
  12．12,000rpm离心2min，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底
    晾干。注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后
    续酶促反应（酶切、PCR等）。
  13. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50
    μl Buffer 4 #，室温放置1min，12,000 rpm离心1min，收集RNA溶液，
    -70℃保存RNA，防止降解。
  注意：1）Buffer 4 #体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。
       2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的Buffer 4 #重复步骤3 。
       3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸到吸附柱中，
           重复步骤13。。
温馨提示：不可用于临床治疗。

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