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Axis-Shield分离液 OptiPrepTM 分离液
Annexin-V 细胞双染凋亡检测/BestBio-
DNA Ladder
通过自由贸易试验区市场监管局认证 
全血基因组DNA提取试
BIOTIN DNA标记试剂盒| 货号： | M3040 |
| 供应商： | MBCHEM |
| 英文名： | 详见说明书 |
| 数量： | 大量 |
| CAS号： | M3040 |
| 保质期： | 一年 |
| 保存条件： | -20℃避光保存 |
| 规格： | 250 assays/1000 assays |
产品特点(250T 产品说明)
- 操作简单：简单快速的实验流程；
- 快速便捷：20分钟内可以完成实验；
- 通用性好：可直接使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测；
- 高性价比。
Mbchem™ Hoechst 33342/PI双染试剂盒提供了一种方便快捷的基于荧光检测的方法来检测凋亡细胞中染色质的改变。
本试剂盒提供了两种即用型的核酸染料：Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidine Iodide, PI)。
Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342。分子式为C27H28N6O·3HCl·3H2 O，分子量为615.99，CAS Number 23491-52-3。 Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。Hoechst 33342溶于水，溶解度可达20mg/ml。
碘化丙啶(Propidine Iodide, PI，当结合DNA后，最大激发波长和最大发射波长约为535/617 nm)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI够透过细胞膜而使细胞核染红。
Hoechst 33342与DNA结合后，凋亡细胞中的凝聚染色质会比正常细胞中的染色质染色更深、更加明亮。PI只能渗透进入死亡细胞，两种染料同时使用，通过荧光显微镜检测或者流式细胞仪检测就可以区分出正常细胞，凋亡细胞和死亡细胞。
产品组成
- Hoechst 33342染色液 1250ul
- PI染色液 1250ul
- 10×染色buffer 25ml
注意：
1、碘化丙啶和Hoechst 33342有毒，应小心保存和使用，注意个人保护。
2、Hoechst 33342/PI是光敏物质，请注意避光保存和使用。
3、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
储存条件
试剂盒所有组分-20℃避光保存，有效期一年。生产日期请见包装。
使用方法
- 染色缓冲液的配制：
- 根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL染色buffer加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
- 离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基。（贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集，胰酶消化时间不易过长，以防引起假阳性。）
4、 取适量细胞用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬，使其浓度大约为1 X 106 cells/ml。
5、 加入5ul Hoechst 33342染色液。
6、 轻轻混匀后室温避光孵育10-15分钟。
7、 用PBS洗涤细胞一次(2000RPM，离心时间5min收集细胞)。
8、 用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬。加入5ulPI染色液。
9、 轻轻混匀后室温避光孵育10-15分钟。
10、再用PBS洗涤细胞一次(2000RPM，离心时间5min收集细胞)，加PBS稀释至适当浓度后检测结果。
11、用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。Hoechst33342的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，PI的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。
结果分析
正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst33342+/PI++）。
温馨提示：不可用于临床治疗。
