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免疫沉淀（IP）实验服务外包
原代T细胞、悬浮细胞系、Raw264.7细胞
ELISA检测
通过金山区市场监管局认证 
蛋白Marker
免疫荧光检测| 提供商： | 上海百由 |
| 服务名称： | 免疫印迹 |
Western Blotting 标本要求：
- 组织标本要尽可能新鲜，-80℃或液氮保存，需低温运输，提供量不少于100mg。
- 细胞样本，收集好后-80℃或液氮保存，需低温运输，提供量不少1*106个。
- 蛋白标本需-80℃或液氮保存，最好是加入上样缓总冲液变性后分装保存，低温运输，需提供蛋白浓度。
- 客户提供有效的一抗，本公司也可以代购。客户提供欲检测目的蛋白的详细背景资料。以及提供样本的种属，类型。
- 需要预实验的，根据目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验。
实验步骤：
- 蛋白提取 根据标本类型及检测蛋白类型，选择对应的提取试剂。标本类型主要分为组织标本、细胞标本等。蛋白类型分为：胞膜蛋白、胞浆蛋白、胞核蛋白，磷酸化蛋白、非磷酸化蛋白等。
- 蛋白浓度测定及变性 一般使用BCA或bradford法测定总蛋白浓度。浓度测定完成后，加入上样缓冲液，沸水浴5分钟，将蛋白分装保存。
- 制胶 根据检测的蛋白分子量的大小，确定所需SDS胶的浓度，进行配制。
- 上样 将变性后的蛋白加入上样孔中，需要确保所有标本的总蛋白量一致。
- 电泳
- 转膜 根据蛋白MARKER分离的情况，确定所需蛋白的位置。将胶从玻板上取下，做成三明治夹层进行转移。
- 封闭 转膜完成后，将膜取出。用脱脂奶粉或BSA等封闭液封闭，浓度一般为3%-5%。封闭时间可以选择4℃过夜或室温1小时等。
- 孵一抗 将一抗稀释至适当浓度，与膜充分结合。孵育时间可以选择4℃过夜或室温2小时、37℃1小时等。
- 洗脱 孵育完成后，用TBST（PH 7.2-7.4）洗脱未结合抗体。5分钟3次。
- 孵二抗 加入稀释好的、与一抗对应的、HRP标记的二抗，孵育时间一般为室温1小时。
- 洗脱 孵育完成后，用TBST（PH 7.2-7.4）洗脱未结合的二抗。
- 显色曝光 配制ECL使用液，滴加到洗脱好的膜上，于暗室中用胶片感光。用显影定影试剂盒进
- 进行显影、定影。将定影后的胶片晾干、扫描、存档。
结果提供：
- 详细的实验步骤
- 蛋白定量结果
- 目的蛋白检测图片
- 内参检测图片
- 灰度分析结果
- 预实验结果
服务时间：
接到样品10个工作日内
欢迎来电来函详谈，量大者从优
