蛋白质芯片技术是继基因芯片技术后发展起来的生物检测技术,是蛋白质组学研究中除了酵母双杂交、双向电泳技术、质谱技术等之外的一种重要的工具。蛋白质芯片技术具有平行、快速、自动化的优点,并且检测到的平行数据误差更小,更准确,这对于高通量的研究具有非常重要的意义。它的出现对于生物学、临床检验医学、遗传学、肿瘤学等多学科的进步具有极大的推动作用。蛋白质芯片技术根据芯片上固定的物质不同又分为抗体芯片与蛋白芯片。
近几年来,随着抗体技术的发展,抗体库的建设速度越来越快,生产了大量优质的抗体,从而推动了抗体芯片技术的发展与应用。抗体芯片技术在医学领域的应用,带动了相关科技论文的发表,数量与质量均呈上升趋势。
英睿生物引进国外几家知名抗体芯片技术公司的技术和产品,建立了丰富的抗体芯片技术平台,推出的100余种抗体芯片可以用于检测生理或病理过程相关蛋白的表达丰度、筛选疾病标志物、探索药物作用机制、检测信号通路中成员的激活状态。使用的芯片产品已经在Nature Medicine, Journal of Clinical Investigation, Cancer Research, PLoS One, Journal of Biological Chemistry等专业学术杂志发表了高质量的论文。可以检测的样本包括培养的细胞、细胞培养上清、血清、血浆、冰冻组织、以及福尔马林浸泡或者Trizol浸泡的组织,石蜡包埋组织和切片也可以进行应用。
技术路线:
FMB蛋白质标记法技术路线 RayBiotech Sandwich法技术路线
样品要求
► 细胞
约1×107个贴壁细胞去培养基后,常温PBS洗涤3次,直接加入裂解缓冲液,推荐使用Full Moon的Protein Extraction Buffer 或者RIPA Lysis Buffer,根据培养皿大小加入适量缓冲液,反复吹打,待细胞裂解后,收集溶液,4℃离心后收集上清,置-70℃冰箱保存,干冰运输。
悬浮培养细胞直接收集,收集约1×107个细胞,常温PBS洗涤3次,低速离心沉淀细胞,弃去PBS(尽量去除干净),直接加入裂解缓冲液,推荐使用Full Moon的Protein Extraction Buffer 或者RIPA Lysis Buffer,根据细胞数量加入适量缓冲液,按操作流程裂解后,4℃离心后收集上清,置-70℃冰箱保存,干冰运输。
► 组织
采集新鲜组织(注意:生物体血液限流后20分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净(尽量洗净血液),切为小块,放入液氮速冻后-70℃保存,干冰运输,或福尔马林/TriZol中4℃保存,一周内,常温运输。
► 血清和血浆
采集新鲜血液,切忌溶血。全血分离血清,或EDTA抗凝血分离血浆,取100-500微升置-20℃或-70℃冰箱保存,干冰运输。
备注:
♦ 本市内细胞样品也可以直接常温运送,运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口,然而某些实验条件中包含时间限制,仍建议冻存后运输。
♦ 所使用的1.5ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌,装好样品后管口需要以封口膜封好。
♦ 快递运输所用干冰量至少为8公斤,且运输用泡沫箱需用封箱带密封。
服务流程
步骤1:蛋白质抽提;
步骤2:抽提蛋白质生物素标记;
步骤3:标记后样本与芯片杂交;
步骤4:芯片扫描,数据读取和分析;
步骤5:提供服务报告。
服务报告内容
♦ 实验图像:芯片扫描图(玻片型芯片,Jpg格式)。
♦ 实验数据:包括原始数据和处理数据;
a) 原始数据包括了每个探针点(probe)的信号值,以及重复点的荧光信号的均值、CV;
b) 蛋白质表达水平检测芯片处理数据包括样本所有位点与内参蛋白荧光信号的比值R以及样本间的比值;
c) 磷酸化水平检测芯片处理数据包括样本所有磷酸化位点磷酸化水平以及样本间磷酸化水平的变化。
♦ 实验文件:抗体芯片实验操作指南。
♦ 报告文件:项目总结报告。