MALDI-TOF/MS |
质谱技术的基本原理是样品分子离子化后根据不同离子间质荷比的差异来分离并确定分子质量,一台质谱仪一般由进样装置,离子源,质量分析器,离子检测器和数据分析系统组成。不同类型的质谱仪,主要是根据离子化源和质量分析器这两个部件来命名的。一般ESI离子源通常与四级杆/离子阱质量分析器相匹配,而MALDI通常与飞行时间检测器相匹配。 我们公司目前提供MALDI-TOF-MS(PMF)检测服务。可对多种样品进行检测,如2D胶点,SDS-PAGE条带等。 肽质量指纹图谱方法(PMF):分析蛋白质被酶切后的多肽混合物的质量,结果可以在蛋白质序列库中进行理论预测,并对质谱实测多多肽混合物质量与理论数据进行比较。相匹配时,蛋白质便被明确鉴定。这一方法的理论基础是,每个蛋白质经过酶解成长短不一的肽段后,同一时间获得所有肽段分子质量而形成的肽段分子质量图谱对此蛋白质应是专一而特异的。 MALDI-TOF-MS分析 一、电泳结果处理 1、识别和比对可辨认的蛋白点 2、计算蛋白点的光密度 3、统计所有存在差异的蛋白点 二、蛋白点质谱鉴定 将差异的蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,将结果与蛋白质序列库进行匹配,明确鉴定出差异蛋白点。 质谱的数据通过MASCOT数据库检索来确定蛋白点所对应的基因 三、差异蛋白质分析 1、Gene Ontology分析 2、Pathway分析 3、转录因子(TF)分析 把差异蛋白里面的转录因子重点分析(包括新基因) 【发表论文】 北京生命科学研究所(LC-MS/MS)
|