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流式细胞检测
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RT-PCR技术服务
Western Blot技术服| 提供商： | 汉藤 |
| 服务名称： | ELISA检测服务 |
| 规格： | 板 |
技术简介
ELISA是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及可自动化操作等特点。它适合用于检测样品数量多，或者经mRNA表达谱芯片、蛋白芯片或蛋白质组学等实验找出差异蛋白后，进一步验证差异蛋白。ELISA的原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。然后用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
实验概况
酶联免疫吸附剂测定可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。常用的方法有双抗体夹心法、间接法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、以及应用亲和素和生物素的ELISA。其中双抗夹心法是最常用的方法，步骤如下：
（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质。
（2）加受检标本，使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
（3）加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
（4）加底物，夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
案例展示
ELISA检测抗人OPN蛋白抗体特异性
左图添加了人OPN蛋白N端（1-166aa），右图添加了人OPN蛋白C端（167-314aa）。不同抗体对人OPN蛋白的识别特异性如图所示，其中2C5，2H9，2F10和2E11识别N端，1F11识别C端。结果表面各个抗体对人OPN蛋白均有很好的识别特异性。
应用范围
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位；
2、研究抗酶抗体的合成；
3、显现微量的免疫沉淀反应；
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
技术特点
1、灵敏度高(可达ng甚至pg水平)；
2、特异性好；
3、操作简单；
4、实验周期短；
5、应用范围广。
客户提供
1、尽可能详细的背景资料。
2、实验样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清 等，邮寄前请与我公司技术支持沟通确认。
3、检测试剂盒（或购买我公司的检测试剂盒）。
注意事项
1、客户收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
2、对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用。
3、对因特殊原因需要周期收集的标本，需将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存，并避免反复冻融。
4、标本2-8 ℃可保存48小时，-20 ℃可保存1个月。-70 ℃可保存6个月。
5、部分激素类标本需添加抑肽酶。
6、强烈推荐客户在取材前先与我公司销售技术人员沟通，前期的取材直接影响到您的实验结果。
我们提供
（1）根据实验具体需求，提供492或490nm、450nm、405nm、585nm等各种波长的ELISA检测数据；
（2）完整的实验报告单（包括实验步骤、仪器试剂等信息）。
