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ELISPOT分析技术服务
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流式细胞检测
流式细胞分选
ELISA技术服务
RT-PCR技术服务
Western Blot技术服| 提供商： | 汉藤生物 |
| 服务名称： | 双荧光素酶报告基因检测服务 |
| 规格： | 次 |
基本概念
Luciferase报告基因检测服务，采用荧光素酶报告基因检测系统，以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)活性。该系统的检测原理是，荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在荧光素氧化的过程中，会发出生物荧光，然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪或液闪测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光，荧光闪烁总数与样品中存在荧光素酶的活性成正比。
实验流程
- 构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如psiCHECK等。
(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
(3) 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
应用范围
检测转录因子与目的基因启动子区DNA的相互作用
技术特点
1、采用Promega公司特有psiCHECK质粒；
2、所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；
3、采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。
服务流程
1、PCR扩增靶基因的Promoter，或直接合成结合位点序列；
2、片段裁切或点突变设计靶基因的Promoter并以PCR扩增，或直接合成序列；
3、将上述不同DNA片段分别克隆至报告载体pGL4质粒；
4、将报告载体转染待检细胞；
5、多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。
客户提供
- miRNA与靶基因的信息；
- 相应检测细胞株。
1、克隆含有靶基因3’UTR或结合位点序列的报告质粒；
2、检测结果与完整的实验报告。
