货号: | 11123ES10 |
供应商: | 上海翊圣生物科技有限公司 |
英文名: | HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
保存条件: | -20℃ |
规格: | 10 T |
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES10 | 10 T | -20℃ | 236.00 |
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | -20℃ | 955.00 |
产品描述
HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含gDNA digester和2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase,RNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行特别优化,比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR®Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择UNICONTM qPCR SYBR® Green Master Mix,HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix或HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
11123ES10 (10 T) | 11123ES60 (100 T) | ||
11123-A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 2×1 mL |
11123-B | 5×gDNA digester Buffer | 20 μL | 200 μL |
11123-C | gDNA digester | 10 μL | 100 μL |
11123-D | 2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus | 100 μL | 1 mL |
产品应用
适用于两步法RT-qPCR。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 10 μL |
5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
gDNA digester | 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。
组分 | 使用量 |
第1步的反应液 | 10 μL |
2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus | 10 μL |
标准程序(可获得高质量的cDNA)
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
温度 | 时间 |
42℃ | 15 min |
85℃ | 2 min |
※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。
注意事项
1)gDNA digester和2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打充分混匀后,准确吸取;
2)如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL),请确保RNA是溶于水中而不是TE中,因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制;
3)可以不经过基因组去除步骤,直接用2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus进行逆转录,这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×HifairTM Ⅱ SuperMix配套使用,因其不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验;
4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;
5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。