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P-reagent
ProteomeLab SDS-Gel MW Analysis Kit
15%预制胶
通过泰州医药高新技术产业开发区市场监督管理局认证 
| 货号： | Molebio-004 |
| 供应商： | wehelp |
| 保存条件： | -20度避光保存 |
| 规格： | 1ml |
SYBR Green Ӏ是一种结合于dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的荧光染料SYBR Green Ӏ与dsDNA 结合荧光信号会增800-1000倍，是一种常用的qPCR荧光染料。该染料性价比高、操作简便，具有高灵敏度、信噪比高等优势，可应用于基因表达差异分析，基因芯片等。
Molebio-004中使用了全新高效的Taq DNA Polymerase与Wehelp独特配制的PCR缓冲体系，Taq DNA Polymerase具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性，PCR反应灵敏度高、特异性强。
优点
- 配制好的预混合液中只需加入模板、 引物、灭菌水便可进行 Real Time PCR 反应，操作简单方便。
- 适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。
- SYBR Green Ӏ 染料经济实惠，使用方便，灵敏度高、信噪比强。
注意事项
- -20℃避光保存，防止污染。
- 使用前，将产品室温下解冻，并轻轻涡旋混匀，解冻后所有实验应在冰上操作。
- 避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
- 在荧光定量PCR仪上进行实时PCR，并在退火或延伸步骤记录荧光信号。
- 本产品未添加ROX校正染料。
- Ø 本产品不能用于探针法荧光定量PCR。
使用指导
1、PCR反应体系试剂 50 μl 反应体系 终浓度 2× (Golden) SYBR Mixture 25 μl 1× 10 μM Forward Primer 1 μl 0.2 μM
(0.05-1 μM)10 μM Reverse Primer 1 μl 0.2 μM
(0.05-1 μM)Template DNA 2 μl ddH2O to 50 μl
2、PCR循环反应条件
反应条件优化步骤 循环次数 温度 时间 1 1 96℃ 2分 2 35~40 95℃ 15 秒 60~64℃
(信号采集点)1分 3 1
(熔解曲线)95℃ 15秒 60℃ 1分 95℃ 15秒 60℃ 15秒 - 引物浓度：一般以引物浓度0.2 μM为最佳浓度，终浓度0.05-1.0 μM为参考范围。降低引物浓度提高反应特异性；增加引物的浓度提高扩增效率，优化反应体系。
- 退火温度：升高退火温度是常用的提高反应特异性的方法，以60-64℃作为参考范围。若因Tm值较低引起实验结果不佳，可采用三步法进行PCR扩增，退火温度的参考范围为56℃-64℃。
- 延伸时间：推荐使用两步法PCR，延伸时间设置为1 min。若提高扩增效率，可尝试增加延伸时间，或尝试三步法PCR。
- 三步法荧光定量PCR
步骤 循环次数 温度 时间 1 1 96℃ 2分 2 35~40 95℃ 15 秒 56~64℃ 30秒 72℃
(信号采集点)32秒 3 1
(熔解曲线)95℃ 15秒 60℃ 1分 95℃ 15秒 60℃ 15秒 - 联系方式
- 电 话：0523-86201335
- 联系人：庄女士
- 产品咨询：8010 技术咨询：8007
传 真：0523-86201325
邮 箱：sales@wehelpinc.com
地 址：江苏省泰州医药高新区药城四期G75栋2层
温馨提示：不可用于临床治疗。
