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碱性磷酸酶染液 (偶氮偶联法,适用于细胞样本)

产品价格: ¥360.00

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所在地区:
中国上海
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长期有效
最后更新:
2021-03-30 01:30:01
浏览次数:
30

产品详情

品牌名称:
上海雅吉生物科技有限公司
货号: D001-1
供应商: 上海雅吉生物科技有限公司
数量: 100
英文名: cAKP Stain
保质期: 6个月
保存条件: 4-8度保存
注册证号: 仅供科研
规格: 可染20~30张片/15ml×6/30ml×6/60ml×6
【产品介绍】碱性磷酸酶染液 (偶氮偶联法,适用于细胞样本)主要用于慢性粒细胞白血病与其他类型白血病、骨髓纤维化、化脓性感染时的鉴别诊断。适用于血涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片、石蜡包埋的切片。
【染色原理】细胞中的碱性磷酸酶,在碱性缓冲液中,催化底物水解,生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生成不溶性的偶氮染料,沉着于有CAKP活性的部位。染色结果为血涂片中细胞核呈紫蓝色(苏木素复染)或绿色(甲基绿复染),阳性者胞浆中出现红至红棕色颗粒,有些为棕褐色或咖啡色颗粒。
【所需仪器】光学显微镜、玻片、染缸、滴管、秒表、记号笔等。

碱性磷酸酶染液 (偶氮偶联法,适用于细胞样本)产品图片




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细胞样本的前处理  

一、匀浆介质
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、细胞样本的前处理:
1、细胞沉淀的收集:
① 悬浮细胞: 对于悬浮培养的细胞,直接通过离心收集细胞沉淀,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
② 贴壁细胞: 对于贴壁培养的细胞,用胰酶将细胞消化下来,或用细胞刮将细胞刮下来,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
我们一般建议客户,细胞密度最好不要小于一百万个/ml。
2、细胞沉淀的洗涤:
在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等渗), 轻轻颠倒混匀,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
重复上述操作反复洗涤1~2次。
3、匀浆的方式:手工匀浆,超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。
① 手工匀浆:在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中(2ml玻璃匀浆管),将玻璃匀浆管置于冰水混合物中,手动匀浆3分钟,然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。
② 超声破碎:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,在冰水浴条件下进行如下操作:
     a、用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次,间隙10秒反复3~5次。
      b、用超声细胞破碎仪,300W功率,每次超声3~5秒,间隔30秒,重复4~5次。
③ 裂解液裂解 
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。
1、SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。
2、NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40,也是常用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用(SDS基本会使蛋白变性失活)。
去垢剂属性只是一方面,buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素
由于很多裂解液都是蛋白变性剂,对酶活力的测定有一定的影响,一般不推荐用裂解液进行裂解。
④ 反复冻融:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,放低温冰箱中结冰,溶解,再结冰,再溶解,反复3次左右)。
                由于反复冻融对酶活力影响较大,一般不推荐使用

碱性磷酸酶染液 (偶氮偶联法,适用于细胞样本)主要用于慢性粒细胞白血病与其他类型白血病、骨髓纤维化、化脓性感染时的鉴别诊断。适用于血涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片、石蜡包埋的切片。
温馨提示:不可用于临床治疗。

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