货号: | G019-1 |
样本: | 动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织 |
标记物: | CD26, CD27, CD28, CD30 |
适应物种: | 血清,血浆 |
应用: | 通用型 |
检测方法: | 分光光度法 |
检测限: | 6个月 |
供应商: | 上海雅吉生物科技有限公司 |
数量: | 100 |
规格: | 50T/100T |
【所属类别】:仅供科研
【规格】:50T 20T
【检测方法】:分光光度法
【保存方法】:4℃保存6个月;避免反复冻融
定义:细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象,二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时,细胞膜发生渗漏,细胞内容物包括细胞器及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程,起始阶段,染色质固缩、分离并沿核膜分布,细胞质亦发生固缩,但细胞膜依然完整未失去选择透性;在凋亡后期,核染色质断裂为大小不等的片断,与某些细胞器如线粒体一起聚集,为反折的细胞膜包围,后逐渐分离,形成凋亡小体。
细胞周期检测试剂盒 (微板比色法)操作步骤
(1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
(2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
(6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
(7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
(8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
细胞周期检测试剂盒 (微板比色法)相关产品如下:
G002-2 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 (荧光及显色法,石蜡切片) | 20T | 1800元 |
50T | 2800元 | ||
G002-3 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 (荧光及显色法,冰冻切片) | 20T | 1800元 |
50T | 2800元 | ||
G002-4 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 (荧光及显色法,细胞样本) | 20T | 1800元 |
50T | 2800元 | ||
G003-1 | Annexin V-FITC/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒 | 10T | 380元 |
G003-2 | 20T | 600元 | |
G003-3 | 50T | 980元 | |
G004-1 | Annexin V-EGFP/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒 | 10T | 380元 |
G004-2 | 20T | 600元 | |
G004-3 | 50T | 980元 | |
G005-1 | Annexin V-PE 细胞凋亡检测试剂盒 | 10T | 600元 |
G005-2 | 20T | 900元 | |
G005-3 | 50T | 1600元 | |
G006 | 线粒体提取试剂盒 | 50T | 800元 |
G007 | 线粒体/细胞核提取试剂盒 | 50T | 800元 |
G008-1 | 线粒体蛋白提取试剂盒 | 50T | 980元 |
G008-2 | 100T | 1680元 | |
G009-1 | 线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1法) | 10T | 680元 |
G009-2 | 20T | 980元 | |
G009-3 | 50T | 1680元 |
一、匀浆介质
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、细胞样本的前处理:
1、细胞沉淀的收集:
① 悬浮细胞: 对于悬浮培养的细胞,直接通过离心收集细胞沉淀,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
② 贴壁细胞: 对于贴壁培养的细胞,用胰酶将细胞消化下来,或用细胞刮将细胞刮下来,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
我们一般建议客户,细胞密度最好不要小于一百万个/ml。
2、细胞沉淀的洗涤:
在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等渗), 轻轻颠倒混匀,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
重复上述操作反复洗涤1~2次。
3、匀浆的方式:手工匀浆,超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。
① 手工匀浆:在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中(2ml玻璃匀浆管),将玻璃匀浆管置于冰水混合物中,手动匀浆3分钟,然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。
② 超声破碎:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,在冰水浴条件下进行如下操作:
a、用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次,间隙10秒反复3~5次。
b、用超声细胞破碎仪,300W功率,每次超声3~5秒,间隔30秒,重复4~5次。
③ 裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。
1、SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。
2、NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40,也是常用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用(SDS基本会使蛋白变性失活)。
去垢剂属性只是一方面,buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素
由于很多裂解液都是蛋白变性剂,对酶活力的测定有一定的影响,一般不推荐用裂解液进行裂解。
④ 反复冻融:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,放低温冰箱中结冰,溶解,再结冰,再溶解,反复3次左右)。
由于反复冻融对酶活力影响较大,一般不推荐使用