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静音室
实验室整体规划设计
CRISPR/Cas9定点突变细胞系的构建
课题整体方案合作平台
Cas9慢病毒包装
CRISPR/Cas9基因敲除
CRISPR/Cas9敲除细胞
RNAi慢病毒包装
稳定过表达蛋白的慢病服务简介
根据给定GeneID或DNA序列，需要插入的DNA序列，以及插入位置。在插入位置位置附近设计3个sgRNA，构建载体质粒。根据插入DNA的序列以及插入位置两侧的DNA序列，构建包含插入序列以及两侧左右同源的Donor载体。验证待基因插入细胞的单克隆生长能力、药杀浓度、转染条件、载体效率。 完成以上工作后，将最高效率的载体与Donor载体共转染待基因插入的细胞。转染后进行药杀，之后通过有限稀释进行单克隆的分选。最终通过测序验证是否得到插入的细胞系。
技术信息
1. 基因敲入(Gene Knockin)
Cas9系统使目标区域的基因组断裂，利用基因组自身的修复机制，将外源基因（两端包含同源臂）通过同源末端重组的方式插入到基因组中，获得稳定遗传的一种技术。
2. 基因敲入技术特点
2.1 通过将基因敲入的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。
3. CRISPR/Cas9技术与RNAi技术的比较
3.1 CRISPR/Cas9技术优势（1）在基因组水平上编辑目标基因，高度模拟目标模型。（2）遗传背景干净清晰，多次重复实验结果更稳定。（3）技术热点高增加文章的影响力。3.2 RNAi技术的缺点（1）仅部分抑制该基因的功能。（2）在转录后（包括翻译）水平上下调基因表达，非基因组水平上的彻底改变！（3）会出现每次实验间的误差。（4）非特异性强；脱靶效率高（Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )
蓝盾优势
1.特有的检测手段可大大缩短服务周期2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定3.若实验未按预期完成，技术费用全免！4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同
蓝盾服务
客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因插入的细胞株的获得
