呋喃唑酮检测试剂盒

货号：	YJ2111
供应商：	上海研谨生物科技有限公司
数量：	1000
保质期：	12个月
保存条件：	2～8℃
规格：	96孔/盒

呋喃唑酮代谢物

快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条 上预包被偶联抗原，样本中的残留物呋喃唑酮代谢 物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮 代谢物抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色， 样本吸光度值与其所含残留物呋喃唑酮代谢物的含 量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物 呋喃唑酮代谢物的含量。

二、试剂盒特性

试剂盒灵敏度：  0.01ppb

 孵育温度： 25℃
 孵育时间： 30min~15min

交叉反应率

呋喃唑酮代谢物 ································· 100% 呋喃它酮代谢物 ······························· ＜0.1% 呋喃妥因代谢物 ······························· ＜0.1% 呋喃西林代谢物 ······························· ＜0.1%
样本回收率

肌肉组织  ································· 95%±25%
蜂蜜 ······································· 85%±23%
三、试剂盒组成  
    
 1 微量测试孔 每条 8 孔，一板 12 条
    
  标准液×6 瓶 0ppb 0.01ppb
 2  0.03ppb 0.09ppb
  （1ml/瓶）  
   0.27ppb 0.81ppb
    
    
 3 酶标记物 7ml 红色帽
    
 4 抗体工作液 7ml 蓝色帽
    
 5 底物 A 液 7ml 白色帽
    
 6 底物 B 液 7ml 黑色帽
    


7 终止液 7ml 黄色帽
   
8 20X 浓缩洗涤液 40ml 白色帽
   
9 2X 浓缩复溶液 50ml 透明帽
   
10 衍生化试剂 10ml 白色帽
   

四、所用仪器、试剂 具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、

刻度移液管、天平（感量 0.01g）、氮 吹仪、恒温箱、恒温水浴锅

微量移液器：单道 20~200µl、单道 100~1000µl、 多道 30~300 µl

试 剂：氢氧化钠、K2HPO4·3H2O、正己烷、 乙酸乙酯、浓 HCl

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试 剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净， 必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实 验结果。

 样本前处理需配制 配液 1 0.1M K2HPO4 溶液：

称 11.4g K2HPO4·3H2O 加去离子水溶解定 溶至 500ml。

配液 2  1M HCl 溶液：

取 8.6ml 浓 HCl 加去离子水定容至 100ml。 配液 3 1M NaOH 溶液：

称 4g NaOH 加去离子水定容至 100ml

配液 4  样本复溶液：

将2X 浓缩复溶液用去离子水按 1：1 稀释。

样本处理

（a）肌肉样本处理方法

1、称取 1±0.05g 的均质物（肌肉组织），分别加 入 4ml 的蒸馏水，0.5ml 1M HCl 溶液和 100µl
衍生化试剂，充分振荡 2min；

2、在 37℃过夜孵育（大约 16h）或 56℃水浴中孵 育(2h)；



3、分别加入 5ml 0.1M K2HPO4 溶液，0.4ml 1M 1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温
 NaOH 溶液和 6ml 乙酸乙酯，充分振荡 30s；  （20～25℃）。
4、在室温下（20-25℃）4000r/min 以上离心 10min 2、 使用之后立即将所有试剂放回 2～8℃。
 （如出现乳化现象或乙酸乙酯层不足 3ml ，在 3、 在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于
 80 ℃ 水浴孵育样品 10min 并重复离心；或提  洗板的一致性，正确的洗板操作是 ELISA 测定
 高转速和延长离心时间重复离心）；  程序中的要点。
5、取出 3ml 的乙酸乙酯到另一个容器中于 50℃氮 4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜
 气/空气吹干。  盖住微孔板。
6、用 2ml 正己烷溶解干燥物，再加入 1ml 样本复  操作步骤：
 溶液充分混合 30s；在室温下 4000r/min 以上离 1、从 2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～
 心 10min；去除上层正己烷相（如出现乳化现  25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使
 象，则去除上层正己烷后于70℃水浴10-20min，  用前均须摇匀。
 重复离心）； 2、取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放
7、取 50µl 下层用于分析。  入自封袋，保存于 2-8℃。
 样本稀释倍数:  2 倍 3、配液：将 40ml 浓缩洗涤液（20 倍浓缩）用去
（b）蜂蜜样本处理方法  离子水按照 1：19 稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份
1、称取 2±0.05g 的均质物（蜂蜜），分别加入 4ml  去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
 的蒸馏水，0.5ml 1M HCl 溶液和 100µl 衍生化 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每
 试剂，充分振荡 2min；  个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和
2、在 37℃过夜孵育（大约 16h）或 56℃水浴中孵  样本孔所在的位置。
 育(2h)； 5、加标准品/样品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶
3、分别加入 5ml 0.1M K2HPO4 溶液，0.4ml 1M  标记物 50µl/孔，然后再加入抗体工作液 50µl/
 NaOH 溶液和 6ml 乙酸乙酯，充分振荡 30s；  孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应 30min。
4、在室温下（20-25℃）4000r/min 以上离心 10min 6、将孔内液体甩干，用已稀释的洗涤液 250µl/孔
 （如出现乳化现象或乙酸乙酯层不足 3ml ，在  洗板 4～5 次，每次间隔 15～30 秒，用吸水纸
 80 ℃ 水浴孵育样品 10min 并重复离心；或提  拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺
 高转速和延长离心时间重复离心）；  破）。
5、取出 3ml 的乙酸乙酯到另一个容器中于 50℃氮 7、显色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B
 气/空气吹干；  液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显
6、用 2ml 正己烷溶解干燥物，再加入 1ml 样本复  色 15min。
 溶液充分混合 30s；在室温下 4000r/min 以上离 8、测定：加入终止液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，设
 心 10min；去除上层正己烷相（如出现乳化现  定酶标仪于 450nm 处（建议用双波长 450/630n
 象，则去除上层正己烷后于70℃水浴10-20min，  m 检测，5min 内读数），测定每孔 OD 值。
 重复离心）； 七、结果判定
  
7、取 50µl 下层用于分析。  结果判定有两种方法，粗略判定可用第 1 种方
 样本稀释倍数:  1 倍  
  法，定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与
  
六、酶标免疫分析程序: 其所含呋喃唑酮代谢物量成负相关。
 测定前应须知： 1、粗略判定：



用样本的平均吸光度值与标准液吸光度值比较 即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本 1 的吸光度 值为 0.3，样本 2 的吸光度值为 1.0，标准液吸光度 值分别是：0ppb 为 2.243；0.01ppb 为 1.816；0.03ppb

为1.415；0.09ppb 为 0.74；0.27ppb 为 0.313；0.81ppb

为0.155。则样本1 的浓度范围是0.27ppb～0.81ppb； 样本 2 的浓度范围是 0.03ppb～0.09ppb，乘以其对 应的稀释倍数即为样本中呋喃唑酮代谢物实际浓度。

2、定量分析 （1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分

吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双 孔）除以第一个标准（0 标准）的吸光度值，再乘 以 100%，即

百分吸光率（%）＝ B ×100%
 B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml 标准溶液的平均吸光度值 （2）标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标，以呋喃唑酮代

谢物标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制 标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中， 从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应 的稀释倍数即为样本中呋喃唑酮代谢物实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于 大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

八、注意事项 1、室温低于 25℃或试剂及标本未回到室温（20～

25℃）会导致所有标准的 OD 值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会 伴随着标准曲线不成线性，重复性不好的现象。 所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

4、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；稀释或搀杂 使用会引起灵敏度、OD 值变化；不要交换使用 不同批号的盒中试剂。

6、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴 露在光线下。

7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。标 准品 1 的吸光度值小于 0.5 时，表示试剂可能 变质。

8、该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过 低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期 1、储藏条件：试剂盒于 2～8℃保存，不要冷冻。

2、保质期：该产品有效期为 1 年，生产日期见 包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正 常有效，不影响实验结果，请放心使用。