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microrna载体构建

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2021-05-20 01:30:01
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microRNA简介        microRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入,将帮助我们理解高等真核生物的基因榈母有院透丛拥幕虮泶锏骺赝?      叶民生物为您提供microRNA载体构建技术服务,您只需提供您要做的目的基因序列及ID号,本公司专业的技术人员为您完成microRNA靶位点序列设计分析、及microRNA载体构建;

microRNA载体构建的特点及优点:       1. 超过70成功阻断:利用BLOCK-It RNAi Designer设计软件,可快速高效地设计、克隆出双链寡核苷酸序列,构建出含Pol II启动子启动的用于RNAi分析的载体,用于RNAi分析,100保证提供不少于70的有效阻断(当以50nM转染,而且转染效率至少达80时,一套中3条RNAi中至少有2条达到至少70转录的阻断);       2. 简单的表达跟踪:可通过同-顺反子表达Emerald Green Fluorescent Protein(EmGFP)和目的microRNA (miRNA)使得分析简单以及报告因子活性与阻断之间可靠的相关性       3. 多靶标阻断:同-顺反子(Co-cistronic)表达使得多个靶标同时阻断并且产生综合表现型。       4. 组织特异实验选择:通过选择广泛的目的载体或者Multisite Gateway应用,你可以加入你选择的启动子进行细胞内应用或者体内阻断,在哺乳动物细胞中可进行瞬时或永久的microRNA表达; microRNA载体构建技术服务流程:       1.microRNA靶点的预测          利用软件得到的目的microRNA的预测靶点。        2.获得microRNA对应DNA模板         根据提供的靶序列,合成两条互补的单链DNA模板。或者,设计引物PCR扩增microRNA靶基因3’UTR序列。       3.microRNA靶序列克隆          将合成的两条单链退火成双链(具有粘性末端),或将PCR产物双酶切,后连入经过同样双酶切的miR-reporter载体中,连接产物转化大肠杆菌。       4.阳性克隆鉴定。          挑选转化的菌落,PCR筛选含有插入片段的阳性克隆,测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。         5.准备质粒,菌株         抽提验证正确的质粒,定量。准备含有正确质粒的单克隆甘油菌株。         6.产品包装,发货         提供有microRNA靶序列的报告质粒,并免费提供阴性对照一份。甘油保存菌株各一支。

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