抗菌肽在罗非鱼上的应用研究

 鱼粉是用一种或多种鱼类为原料，经加工后的高蛋白质饲料。全世界的鱼粉主要由秘鲁、智利、日本等国家生产，其中秘鲁与智利的出口量约占总贸易量的70%。中国鱼粉产量不高，主要集中在山东、浙江等省市，国内所需鱼粉大多需要进口。近几年来随着养殖业的集约化发展，对鱼粉的需求量越来越多，而且鱼粉的价格也呈现出逐渐增长的趋势，因此我国饲料工作者一直研究探索低鱼粉日粮和无鱼粉日粮，但迄今鱼粉仍为重要的动物性蛋白质添加饲料。抗原肽

抗菌肽（Antimicruobial peptides）是生物体免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的小分子肽类物质，广泛存在与昆虫、动植物及人体内。抗菌肽具有非特异性的抗细菌、真菌、病毒、肿瘤细胞、原虫等作用，且不破坏人体的正常细胞。如能较好的开发利用，有望给临床医学、药学、食品加工、动植物转基因等领域带来革命性的进展，开发利用前景广阔。目前，抗菌肽制剂大多处于研究过程中，抗菌、抗病毒等研究报道较多，实际生产应用研究较少。本研究应用高产抗菌肽CEC-38的乳酸菌发酵脱皮豆粕，添加到罗非鱼日粮中，部分替代鱼粉，以验证纯植物发酵蛋白在替代鱼粉日粮中的应用，以及对罗非鱼生长性能的影响，为植物发酵蛋白在水产料中替代鱼粉的应用提供参考。正戊醇1 材料与方法1.1试验设计选取平均体重为（56.0±0.56）g的健康罗非鱼240条，随机分成4组（对照组，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组），每组3个重复，每个重复20条，驯养10天，试验基础饲料参照NRC鱼类营养需要的营养水平，以全鱼粉作为蛋白源；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别用生物T蛋白替代20%，40%，60%的鱼粉。1.2 饲养管理  浙江省检察官进修学院 试验罗非鱼饲养在室内水族箱内，按体重的3%投喂饲料，每日投饲2次，投饲时间分别为每天09:00和17:00，投饲后2 h捞取剩余饲料，烘干，称重。试验周期为40d。试验期间每天记录罗非鱼的摄食量和死亡鱼数量，试验结束后采用尾椎静脉采血，4000rpm，离心15min，取血清。测定血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、免疫球蛋白G（IgG）的含量。试验前后分别空腹称取鱼体重、出肉重，统计平均增重。1.3试验材料    生物T蛋白：为产抗菌肽CEC-38乳酸菌LP55发酵脱皮豆粕，山东宝来利来生物工程股份有限公司提供。1.4 统计分析试验数据采用SPSS13.0软件中的单因子方差分析，用LSD进行组间多重比较，对试验数据进行统计分析，结果均以平均数±标准差表示。2结果与分析2.1 生物T蛋白对罗非鱼生产性能的影响  双向搅拌桩生物T蛋白对罗非鱼生产性能的影响见（表1）表1 不同处理对罗非鱼生产性能的影响 

由表1可见，饲料中用生物T蛋白替代20%鱼粉组即试验Ⅰ组对罗非鱼的增重量、采食量、终体重与对照组相比差异不明显(P>0.05)，明显高于Ⅱ组、Ⅲ组，差异显著(P<0.05)，Ⅰ组的饵料系数与对照组相比，虽然差异不明显，但有所降低，显著低于Ⅱ组、Ⅲ组 (P<0.05)，终出肉重也显著高于Ⅱ组、Ⅲ组（P<0.05）。这说明生物T蛋白在饲料中替代鱼粉是可行的。但高剂量的添加时罗非鱼生长受到了抑制，可能是因为生物T蛋白的添加量大影响了饲料的适口性，导致日粮营养不能满足罗非鱼的生长需要致使其采食量下降引起的。2.2 生物T蛋白对罗非鱼血液生理生化指标的影响生物T蛋白对罗非鱼血清总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G的影响。试验组和对照组罗非鱼血清中TP和ALB的含量基本一致，差异不显著(P>0.05)，但是试验Ⅰ组血清中IgG的含量明显高于对照组、实验Ⅱ组、Ⅲ组，但实验Ⅱ组、Ⅲ组中IgG的含量随着鱼粉的添加而降低，这可能是因为生物T蛋白中的含有抗菌肽，它有抑菌，杀菌作用，因此适度的添加，不但不会影响罗非鱼生长的情况，而且能够加强机体的免疫功能，增强抗病性，因此血清中IgG含量会增高，而过多添加时影响了罗非鱼的生长，致使机体免疫力下降。3 讨论温刘发研究表明，抗菌肽在沸水中30min仍不变性失活，能耐受饲料制粒时的高温作用；规模化发酵生产抗菌肽程序中的高温浓缩工序，可充分杀灭菌体但不导致抗菌肽失活，产品在应用后不会出现工程菌的扩散而导致环境生态问题。抗菌肽作为饲料添加剂对细菌具有较强的抑制作用，能够促进畜禽生长，提高饲料利用率，动物采食后在体内一般无残留，在饲料中长期添加抗菌肽，细菌不易获得耐药性，使用效果稳定，是属于无毒、无残留、无致细菌耐药性的一类环保型饲料添加剂。试验研究表明，抗菌肽用作饲料添加剂，代替抗生素预防和治疗仔猪白痢和雏鸡白痢有明显效果，并对多种细菌均有较明显的杀灭作用。为在饲料工业生产中的应用提供了诱人的前景。抗菌肽作为一种新型饲料添加剂，已经在畜牧业中得到应用，在水产养殖方面，抗菌肽也是鱼、虾、贝等水生动物抗病毒防御系统的主要成分之一。国外在抗菌肽对鳗弧菌、杀鲑弧菌及杀鲑气单胞菌等的抑菌作用方面做过报道，并证实在罗氏沼虾、南美白对虾及海水鱼中均发现有抗菌肽类物质存在。宋理平等在凡纳滨对虾的饲料中添加了重组抗菌肽制剂，摄食量较大，相对增重率得到显著提高。姜兰等研究报道了基因重组抗菌肽的发酵产物浓缩干燥，添加到饲料中，用于中华鳖红脖子病、赤斑病、穿孔病等一些常见病的防治试验，初步结果表明对这几种病害都具有良好的防治效果。王广军等研究了抗菌蛋白在南美白对虾养殖中的应用效果，结果表明，在饲料中添加抗菌蛋白，无论是在日生长速度、相对增重率、饲料系数及成活率，还是抗病力方面均有显著的提高。黄沧海等研究不同抗生素与抗菌肽对罗非鱼生长性能的影响，试验证明，抗菌肽和黄霉素在促进罗非鱼生长方面优于喹乙醇和喹烯***。本试验结果显示，在饲料中适量添加含有抗菌肽成分的生物T蛋白来代替鱼粉，能促进罗非鱼的生长，增强其免疫功能，分析原因，应是脱皮豆粕在发酵后消化率提高，增加了植物发酵蛋白的利用率；另外，发酵过程中产生的抗菌肽CEC-38能够抑制肠道致病菌，同时，从血液生化指标看出，添加生物T蛋白组血清免疫球蛋白含量高于对照组，说明试验组罗非鱼机体免疫力增强了。但值得注意的是，高剂量的替代组罗非鱼的生长有所放缓，可能由于高剂量替代，致使日粮蛋白含量的极显著下降，造成日粮营养不能满足罗非鱼的生长需要，导致其生长缓慢。试验结果证实，20%高产抗菌肽CEC-38乳酸菌发酵脱皮豆粕替代鱼粉，较全鱼粉日粮相比，对罗非鱼生长性能及血清免疫指标均有较好的促进和增强作用。