SWATH(Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra)是瑞士苏黎世联邦理工学院的 Ruedi Aebersold 博士及其团队与AB-SCIEX联合推出的一项全新的质谱技术。与传统的shot-gun技术相比,SWATH采集模式能够将扫描区间内所有的肽段母离子经过超高速扫描并进行二级碎裂,从而获得完整的肽段信息。因此,SWATH技术是一种真正全景式的、高通量的质谱技术,同时也解决了shot-gun鉴定较低重复度的缺点。
借助我公司现有的Triple-TOF 5600质谱系统,SWATH在定量上具有较高的准确度和动态范围,可检测到蛋白质的丰度差异极大,跨越4个数量级。且SWATH方法的灵敏度和动态范围与 SRM 分析水平相当。
图:SWATH技术示意
我公司蛋白质组学平台技术团队对SWATH技术经过长时间的研究及技术开发,成为国内第一家提供SWATH技术服务的公司,现可提供SWATH定量蛋白质复合体和SWATH定量蛋白质组的技术服务。
SWATH定量蛋白质复合体
SWATH定量方法确定蛋白质复合体的成分是SWATH定量方法最常用的应用之一,该方法已经非常成熟,实验流程如下:
图:SWATH定量方法用于判断蛋白质复合体成分的流程图。
SWATH定量蛋白质组
发现差异蛋白质SWATH定量方法基于提取Transition峰面积计算出肽段含量,通过肽段含量推理出蛋白质含量的方法。SWATH定量应用到proteome-wide水平就产生了SWATH定量蛋白质组,以此方法为基础可以迅速锁定几个样品间的差异蛋白质(类似iTRAQ定量蛋白质组)。我公司开发了一项新的技术,采用SWATH定量也可以做到6000个以上的蛋白质的SWATH定量(以人HepG2为例)。
武汉华美采用Tryspin酶解为主的方法获得肽段,肽段除盐后通过LC-MS/MS(5600-plus)进行鉴定和SWATH定量。我们通过严格的质控来确保客户的样品得到最高通量的鉴定和SWATH定量,同时可以依据客户的需求做出实验方案的调整。
我公司的技术特点
l 国内第一家提供SWATH定量蛋白质组的公司;
l 高精度定量:和MRM定量结果保持高度一致(MRM是定量领域的金标准);
信息分析内容
l 根据参考谱图库解析SWATH谱图,鉴定肽段、蛋白,结果可靠性评估;
l 根据碎片离子的XICs进行相对定量,差异表达分析;
l 对鉴定到蛋白GO功能注释、Pathway代谢通路注释;
l 差异表达蛋白GO、Pathway功能富集分析;
l 主成分(PCA)分析,发现差异蛋白质或者复合体成员。