iTRAQ(isobaric tag for relative and absolute quantitation)定量蛋白质组是基于对肽段的NH2-进行标记,将来自不同样品的同一个肽段做上不同的标记,通过标记物质的含量来指示肽段的含量,并根据肽段含量推断出对应蛋白质的含量。该方法因其标记效率高、灵敏度高、定量准确以及一次可以标记至多8个样品等特点,是目前非常流行的定量蛋白质组方法,可以快速发现不同处理、不同突变体、不同环境条件影响的蛋白质组的差异,并且锁定差异蛋白质进行功能研究。
图:8标记iTRAQ定量蛋白质的流程
iTRAQ技术服务优势:
l 灵敏度高,检测限低,可检测出低丰度蛋白;
l 分离能力强,分析范围广,可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定,包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白,膜蛋白和不溶性蛋白;
l 高通量:同时对8个样本进行分析,提高了实验通量,可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析;
l 结果可靠:定性与定量分析结果更加可靠;
l 自动化程度高:液相与质谱联用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。
我公司的技术特点:
l 高效率样品前处理:进行high pH RP-HPLC高效分离,自动化收集保证均一性。
l 高鉴定率:系统全面地研究组织或细胞中尽可能多的蛋白质,可鉴定多达6000种蛋白(以人HepG2为例)。
l 定量精确:每组平行比较可以做8个样本,单个样品标记效率可以达到98%,8标记同时做可减少样本处理和分批上质谱造成的实验误差。
l 质控严格:我们在蛋白提取、多肽酶解、iTRAQ标记等处设定严格的质控,保证实验操作没有问题。
l 仪器性能优良:AB SCIEX 5600-plus是基于高分辨率(~30000)、高质量精度(小于2ppm)质谱平台,可获得更加准确的结果。此外,该仪器无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。
服务内容及实验流程:
l 样本制备与定量;
l 酶切、iTRAQ试剂标记;
l 除盐;
l 等量混合标记肽段;
l MS/MS质谱检测及分析;
l 相关生物信息分析;
l 实验报告提交
信息分析内容:
l 蛋白质鉴定、定量
l 蛋白质GO注释、Pathway代谢通路注释
l 差异蛋白GO、Pathway功能富集分析
l 技术重复性分析(仅针对有重复设计的项目)
l 多样品间表达模式聚类(适用于样本数≥3的项目)
实验报告内容:
l 蛋白质鉴定和定量分析结果;
l 顾客指定蛋白质对应的质谱峰图;
l 完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等;
l 详细的数据分析结果展示
客户送样须知:
1、 您只需提供待测样本,无需提供其他试剂;
2、 您所提供的待测蛋白量应≥50ug,浓度≥5ug/uL,否则同位素无法标记;
3、 您也可以选择直接提供组织或者细胞,后续操作由我们进行。
4、 蛋白质样本需用干冰或液氮寄送,武汉地区客户可上门收样。