货号: | DM-PA008000198 |
供应商: | 上海笃玛生物科技有限公司 |
数量: | 大量现货 |
英文名: | Rabbit anti-human biliverdin reductase B (flavin reductase (NADPH)) polyclonal Antibody |
保存条件: | -20温度 |
规格: | 50μl/150μl |
笃玛生物多克隆抗体的概念:由多个B淋巴细胞克隆所产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体。多克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤:免疫动物、佐剂、免疫原、免疫、取血等。
多克隆抗体的制备步骤
产品名称:兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
英文名称:Rabbit anti-human biliverdin reductase B (flavin reductase (NADPH)) polyclonal Antibody
货号:DM-PA008000198
规格:50μl/150μl
注:仅供科研使用!
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一、器材
剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把,手术刀架,手术刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把,直头止血钳两把,手术缝合线,塑料放血管,纱布等。
二、试剂兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
生理盐水(或PBS)
弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant, FCA)
弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant, FIA)
二甲苯,酒精棉,脱脂棉,2% NaN3
三、免疫原:蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。
四、兔子的选择
兔子的重量应在四斤以上,两耳光滑,明显可见耳静、动脉,健康。
五、免疫兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
用生理盐水稀释免疫原,然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。
注:
抗原注射以前需要收集一些正常血清,已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定,大概需要四天左右时间,可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。
免疫用的抗原必须纯化,否则影响抗体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后,置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化,乳化过程比较费时、费力,但若乳化不充分,会影响免疫的效果,振荡后,1000rpm离心一分钟,如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA,以后都用FIA。
免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射,每点注0.1ml,间隔2周后再于上述部位选不同点注射(不要选择临近位点,否则溃疡愈合不好)。每次免疫的抗原量约100μg。免疫次数在四五次即可,抗原用量大可以减少次数。
六、取血:兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
免疫一周后,可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可。在三次免疫后,可以获得较高效价的抗体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫血。
前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血清。
最后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下:
1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。
2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血)。
3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离,剥离神经和结缔组织。
4、于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。
5、用小拇指垫在血管下,用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断),插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。
6、松开止血钳,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
七、血清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集,37oC烘箱放置2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上离心,10000RCF,10分钟。在血清中加入NaN3 至终浓度0.02%,分装后-20oC保存。
小结:抗血清获得之前要件的抗体的效价、抗体的特异性以及抗体的亲和力;获得抗血清之后,要分装保存抗血清,一般情况下,-20度可保存数月至数年抗体的效价都不会发生变化。抗体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验进行鉴定。
八、还有以下优惠产品: 兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
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兔抗人的Beclin1,自噬相关多克隆抗体
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兔抗人bestrophin3多克隆抗体
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兔抗人脑表达X-连锁2多克隆抗体
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Rabbit anti-human basic helix-loop-helix family, member e40 polyclonal Antibody
兔抗人碱性螺旋-环-螺旋家族成员E40多克隆抗体
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兔抗人碱性螺旋-环-螺旋家族成员E41多克隆抗体
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兔抗人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的多克隆抗体
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兔抗人桥接积分1多克隆抗体
Rabbit anti-human bridging integrator 2 polyclonal Antibody
兔抗人桥接积分2多克隆抗体
Rabbit anti-human bridging integrator 3 polyclonal Antibody
兔抗人桥接积分器3的多克隆抗体
Rabbit anti-human baculoviral IAP repeat-containing 2 polyclonal Antibody
兔抗人杆状病毒IAP重复序列含有-2多克隆抗体
Rabbit anti-human baculoviral IAP repeat-containing 3 polyclonal Antibody
兔抗人杆状病毒IAP重复序列含有-3多克隆抗体
Rabbit anti-human baculoviral IAP repeat-containing 7 polyclonal Antibody
兔抗人杆状病毒IAP重复含7多克隆抗体
Rabbit anti-human baculoviral IAP repeat-containing 8 polyclonal Antibody
兔抗人杆状病毒IAP重复序列含有-8-多克隆抗体
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兔抗人类B淋巴酪氨酸激酶多克隆抗体
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兔抗人博莱水解酶多克隆抗体
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兔抗人胆绿素还原酶B(黄素还原酶(NADPH))多克隆抗体
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Rabbit anti-human bone morphogenetic protein 2 polyclonal Antibody
兔抗人骨形态发生蛋白2多克隆抗体
Rabbit anti-human bone morphogenetic protein 4 polyclonal Antibody
兔抗人骨形态发生蛋白4多克隆抗体
Rabbit anti-human bone morphogenetic protein 7 polyclonal Antibody
兔抗人骨形态发生蛋白7的多克隆抗体
Rabbit anti-human bone morphogenetic protein receptor, type IA polyclonal Antibody
兔抗人骨形态发生蛋白受体类型IA多克隆抗体
Rabbit anti-human bone morphogenetic protein receptor, type II (serine/threonine kinase) polyclonal Antibody
兔抗人骨形态发生蛋白受体,II型(丝氨酸/苏氨酸激酶)多克隆抗体
Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kDa结合蛋白 1 polyclonal Antibody
兔抗人BCL2/腺病毒E1B19kDa结合蛋白1多克隆抗体
Rabbit anti-human BCL2/adenovirus E1B 19kD结合蛋白 like polyclonal Antibody
兔抗人BCL2/腺病毒E1B19kD涂覆结合蛋白就像多克隆抗体
Rabbit anti-human bolA homolog 1 (E. coli) polyclonal Antibody
兔抗人博拉同源1(大肠杆菌)的多克隆抗体
Rabbit anti-human bol, boule-like (Drosophila) polyclonal Antibody
兔抗人BOL,毛坯状(果蝇)多克隆抗体
Rabbit anti-human 2,3-bisphosphoglycerate mutase polyclonal Antibody
兔抗人2,3-bisphosphoglycerate变位酶的多克隆抗体
Rabbit anti-human biphenyl hydrolase-like (serine hydrolase) polyclonal Antibody
兔抗人联苯水解酶样(丝氨酸水解酶)的多克隆抗体
Rabbit anti-human bactericidal/permeability-increasing protein-like 1 polyclonal Antibody
兔抗人杀菌/通透性增加蛋白样1多克隆抗体
Rabbit anti-human breast cancer 1, early onset polyclonal Antibody
兔抗人乳腺癌1,早发性的多克隆抗体
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兔抗人乳腺癌2,早发性的多克隆抗体
Rabbit anti-human BRCA1/BRCA2-containing complex, subunit 3 polyclonal Antibody
兔抗人BRCA1/BRCA2含络合物,亚基3多克隆抗体
Rabbit anti-human bromodomain containing 3 polyclonal Antibody
兔含3多克隆抗体抗人布罗莫
Rabbit anti-human bromodomain containing 7 polyclonal Antibody
兔含7多克隆抗体抗人布罗莫
Rabbit anti-human bromodomain containing 8 polyclonal Antibody
兔含8多克隆抗体抗人布罗莫
Rabbit anti-human brain and reproductive organ-expressed (TNFRSF1A modulator) polyclonal Antibody
兔抗人脑和生殖器官表达(TNFRSF1A调制器)的多克隆抗体
Rabbit anti-human BRF2, subunit of RNA polymerase III transcription initiation factor, BRF1-like polyclonal Antibody
兔抗人BRF2中,RNA聚合酶III转录起始因子亚基,BRF1状多克隆抗体
Rabbit anti-human BR serine/threonine kinase 1 polyclonal Antibody
兔抗人BR丝氨酸/苏氨酸激酶1多克隆抗体
Rabbit anti-human BR serine/threonine kinase 2 polyclonal Antibody
兔抗人BR丝氨酸/苏氨酸激酶2多克隆抗体