SMALL RNA测序产品概述
Small RNA是一类大小约17~40个碱基的单链小分子RNA。小RNA在细胞内有重要的调控功能,具有作为疾病诊断标记物或药物靶标的潜力,正被广泛研究。新一代高通量测序可以在一次测序中获得样本细胞中小RNA的序列信息,能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同疾病状态下已知和未知的小RNA表达水平及其表达差异,为研究小RNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具,尤其能通过测序鉴别新的小RNA。Small RNA主要包括 microRNA、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(piwi-interacting RNA)三类。
应用领域
1、直接参与转录后水平对生物学功能的调控
2、作为生物标志物进行疾病检测和***
3、作为竞争性内源RNA参与生命活动的调节
测序策略
样本要求
样本类型:完整且无污染的Total RNA;
Total RNA需求量(单次)≥ 5.0 μg
RNA浓度: ≥200 ng/μL
RNA纯度:OD260/280=1.8-2.2,OD260/230 ≥2.0;RIN ≥8.0,18S ≥1.5;
样本寄送
Total RNA或者组织样本必须采用干冰进行运输,确保样本到达实验室时仍有干冰剩余,否则严重影响RNA质量。
技术流程
常见问题
Q: 研究small RNA需要提供什么样品?
客户只需提供样品总RNA,无需将small RNA进行分离。提取方法不能按照做转录组的标准提取的,提取过程中不能过柱,不能用LiCl沉淀,否则small RNA会丢失,不能用于small RNA建库。
Q:small RNA测序原理是怎样的?
Small RNA(microRNAs、siRNAs和 pi RNAs等)是生命活动重要的调控因子,在基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等生理过程中起着重要的作用。Illumina能够对细胞或者组织中的全部Small RNA进行深度测序及定量分析等研究。实验时首先将18-30nt范围的Small RNA从总RNA中分离出来,两端分别加上特定接头后体外反转录做成cDNA再做进一步处理后,利用测序仪对DNA片段进行单向末端直接测序。通过Illumina对Small RNA大规模测序分析,可以从中获得物种全基因组水平的miRNA图谱,实现包括新miRNA分子的挖掘,其作用靶基因的预测和鉴定、样品间差异表达分析、miRNAs聚类和表达谱分析等科学应用。