热点实验服务：细胞增殖毒性与Transwell（细胞迁移、侵袭）实验案例介绍

Transwell细胞迁移与侵袭实验服务：细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

细胞增殖与毒性检测MTT检测实验服务：原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT方法用于判断药物、外源性基因、小RNA、蛋白、抗体、细胞因子、血清等对于细胞的作用，以明确上述因子对于细胞生物学行为的影响（如细胞活力、增殖、凋亡等方面）。

细胞增殖与毒性检测SRB检测实验服务：磺酰罗丹明是一种能与生物大分子的碱性氨基酸结合的水溶性蛋白染料，其结合于细胞中的量的多少可以反映总蛋白量进而反映细胞数的多少。在515nm波长处的OD值与活细胞数呈良好的线性关系。SRB法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

细胞增殖与毒性检测CCK-8检测实验服务：Cell Counting Kit简称CCK8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

细胞增殖与毒性检测WST-1检测实验服务：WST-1产生的formazan是水溶性的。WST-1非常稳定，使实验结果更加稳定。WST-1线性范围宽，灵敏度高。可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。WST-1使用时无须同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。 WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。
 
细胞增殖与毒性检测XTT-1检测实验服务：XTT作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臢产物。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲臢产物的吸光度与活细胞的数量成正比。优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性好。缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。
 
细胞增殖与毒性检测MTS检测实验服务：MTS是应用新型的水溶性甲臢化合物快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。MTS被细胞生物还原成一种可溶于组织培养基的甲臢化合物，新陈代谢活跃的活细胞内的脱氢酶类将MTS转化成液态可溶的甲臢化合物，这种甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上测量，而不需要另外作处理。由490nm测量的吸收值所表示的甲臢产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。

实验服务注意事项及标本的储存与运输
1. 实验委托者提供实验分组情况及实验背景资料，有具体要求请事先说明；
2. 实验委托者提供检测细胞或实验室负责提供，请咨询公司以明确是否有检测细胞株；
3. 干预药物由实验委托者提供，如无则由双方协商公司代购；
4. 标本收集与保存：一般情况下由公司实验室负责准备检测样本，实验委托者提供细胞或实验室提供细胞；
5. 细胞样本运输：如实验委托者提供细胞进行试验，细胞样本以干冰运输或者直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；
6. Transwell实验完毕后，照相1-2张/每组细胞。
 
实验咨询：service@jiamay.com
 
 
实验案例      原代XXXX上皮细胞干预培养及MTT细胞增殖毒性检测
实验样本：原代XXXX上皮细胞
实验药物：A药物
刺激浓度：0.1％，0.01％，0.001％，0.000l％
时间点： 30 min、2h、6h、24 h
实验方案：常规细胞传代，用第2～4代细胞。传代后孵育至少24 h至细胞70％融合：细胞移入96孔板内，5×103 细胞/孔,待细胞贴壁后，移去原培养液，加入含0.1％，0.01％，0.001％ ，0.000l％共4个浓度的A药物培养液。在30 min、2h、6h、24 h共4个时间点时实验终止，每孔加入5 mg／mL的MTT溶液20uL，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加DMSO(Dimethyl sulfoxide)150 uL，室温下振荡10 min，立刻在酶联免疫监测仪上测定各孔吸光度值(选择波长490 nm)。每浓度每时间点做5孔。设空白对照1孔 (不加细胞只加培养液),最后比色以对照孔调零。
实验试剂：MTT（sigma）
操作步骤：在96孔板加入细胞100μL/孔（约5×103），置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时；待细胞贴壁后，移去原培养液，加入含0．1％，0．01％，0．001％ ，0．000 l％共4个浓度A药物培养液；在30 min、2h、6h、24 h共4个时间点时实验终止；每孔加入5mg/ml的MTT溶液20ul，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液；每孔加DMSO(Dimethyl sulfoxide)150 uL，室温下振荡10 min，立刻在酶联免疫监测仪上测定各孔吸光度值(选择波长490 nm)。
实验分组：
A 正常培养组
B 0.0001% A药物培养液
C 0.001% A药物培养液
D 0.01% A药物培养液
E 0.1% A药物培养液

结果分析：细胞存活率% =（加药细胞OD-本地OD/对照细胞OD-本地OD）×100％
注：本底OD值（完全培养基加MTT，无细胞）
30 min时，490 nm波长各孔的OD值
 

分组	样本1	样本2	样本3	样本4	样本5	平均值
A	0.487	0.481	0.466	0.473	0.459	0.4732
B	0.465	0.453	0.441	0.437	0.432	0.4456	94.1%
C	0.421	0.416	0.414	0.408	0.435	0.4188	88.3%
D	0.406	0.395	0.388	0.384	0.393	0.3932	82.8%
E	0.388	0.373	0.369	0.377	0.382	0.3778	79.5%
本底	0.007	0.009	0.012	0.008	0.008	0.0088

2h时，490 nm波长各孔的OD值
 

分组	样本1	样本2	样本3	样本4	样本5	平均值
A	0.507	0.524	0.511	0.505	0.496	0.5086
B	0.488	0.479	0.463	0.466	0.470	0.4732	92.9%
C	0.453	0.449	0.466	0.451	0.447	0.4532	88.9%
D	0.428	0.434	0.437	0.419	0.422	0.428	83.9%
E	0.407	0.386	0.393	0.406	0.399	0.3982	78.0%
本底	0.006	0.009	0.007	0.007	0.008	0.0074

6h时，490 nm波长各孔的OD值
 

分组	样本1	样本2	样本3	样本4	样本5	平均值
A	0.569	0.570	0.562	0.557	0.568	0.5652
B	0.547	0.552	0.541	0.536	0.544	0.544	96.2%
C	0.523	0.515	0.511	0.508	0.512	0.5138	90.8%
D	0.475	0.461	0.476	0.455	0.448	0.463	81.7%
E	0.427	0.421	0.418	0.422	0.404	0.4184	73.7%
本底	0.008	0.009	0.007	0.007	0.009	0.008

24h时，490 nm波长各孔的OD值
 

分组	样本1	样本2	样本3	样本4	样本5	平均值
A	0.655	0.647	0.658	0.649	0.662	0.6542
B	0.623	0.619	0.615	0.634	0.622	0.6226	95.1%
C	0.604	0.575	0.591	0.587	0.582	0.5878	89.7%
D	0.503	0.526	0.522	0.518	0.515	0.5168	78.7%
E	0.437	0.448	0.421	0.446	0.438	0.438	66.5%
本底	0.008	0.009	0.009	0.011	0.008	0.009

 
生长曲线：

细胞培养图片：
0.1％                                            0.01％
24h                                              24h
          
6h                                             6h
         
2h                                            2h
          
30mim                                         30min
         
 
0.001％                                        0.0001％
24h                                            24h
         
       
6h                                              6h
         
        
2h                                              2h
          
        
30mim                                          30min
         
        
空白对照


   
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