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细胞免疫化学
Hypoxia信号通路报告基因检测
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| 服务名称： | 细胞生物学：细胞周期实验服务 |
实验技术简介：
细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。生命是从一代向下一代传递的连续过程，因此是一个不 断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂， 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。通常将子细胞形成作为一次细胞分裂结束的标志，细胞周期是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂 形成子细胞为止所经历的过程。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。
实验技术原理：
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
实验操作流程：
1、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次。
2、 加入预冷70%乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保 存一个月，个人建议尽量在最短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等最后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去 比较保存时间对检测结果的影响）。
3、细胞染色
离心收集细胞，以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙 锭（PI），100ug/mL RNase A， 0.2% Triton X-100， 4℃避光孵育30分钟（PI我是直接用PBS配成工作浓度，然后加入细胞沉淀混匀，RNA酶现加，但有时不加发现对实验结果也没太大的影响）。
4、流式分析
以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
分析时，使用FL2-w和FL2-A显示，去除联体细胞。
实验注意事项：
客户提供：
1、提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血；
2、提供新鲜的培养细胞，提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。
交付标准：
完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）
其他：
1、细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
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