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| 服务名称： | 细胞生物学：细胞永生化实验服务 |
实验技术原理：衰老是体外培养的哺乳动物细胞的一般特性。从动物或人的组织细胞 取材培养，体外经过第一次传代后的具有增殖能力的细胞群体称为细胞系。一些细胞系在体外有一定寿命，只能有限期传代，一般不超过50代，称为有限细胞系； 另一类体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力、可以无限传代的细胞系称为永生化细胞系。
实验操作流程：
1、原代细胞的获取 ；
2、永生化基因慢病毒包装、纯化（永生化慢病毒量5X10E7TU，滴度≥1X108TU/ml）；
a.永生化基因慢病毒质粒大抽
b.永生化基因慢病毒重组质粒和包装质粒共转染293T细胞，收集病毒上清
c.过滤上清液
d.慢病毒浓缩和纯化
e.慢病毒滴度检测
3、永生化基因慢病毒感染原代细胞；
4、永生化细胞的筛选。
实验注意事项：
客户提供：
1、提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血；
2、提供新鲜的培养细胞，提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。
交付标准：
1、永生化细胞
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）
其他：
1、体外培养细胞经过自发的或受外界因素的影响而从增殖危机中逃逸，细胞获得持续生长增殖能力的特性.永生化的细胞具有无限增殖生长性，可长期传代，并多伴有核型改变。
2、 原代细胞永生化后即获得无限增殖的能力，但它们没有恶性转化的表型特征，即不能在软琼脂上形成克隆(锚着独立性生长)，也不能在裸鼠皮下成瘤。如果细胞在 永生化的基础上发生更多的分子突变事件如癌基因的活化、抑癌基因的失活、表观遗传突变等，这些突变在细胞中不断累积，达到一定的负荷时，细胞就可能发生恶 性转化，因此细胞永生化实际上可以看作是细胞转化前的一个特殊阶段。
3、目前普遍认为细胞永生化是细胞恶性转化的必经阶段，因为所有的肿瘤细 胞都具备无限分裂的特性。也就是说永生化细胞有可能是肿瘤细胞的前奏，它和肿瘤细胞都是无限增殖的，但是永生化细胞无成瘤性，肿瘤细胞有成瘤性质，它们在 癌基因的活化、抑癌基因的失活、表观遗传突变等方面分子方面应该有很多不同
4、永生化细胞和肿瘤细胞：虽然二者均可无限增殖，永生化细胞没有肿瘤具有的浸润性和转移性 。
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