提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 病理学服务:六胺银法实验服务 |
实验技术简介:六胺银染色是显示真菌效果最佳的一种方法。
实验技术原理:六胺银法(GMS)用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基,醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
实验操作流程:
1、切片脱蜡至水
2、8%铬酸水溶液氧化20min
3、自来水稍洗
4、5%偏重亚硫酸钠液处理1min
5、流水冲洗5min,再用蒸馏水洗2次
6、置入六胺银工作液于温箱内(58—60摄氏度)60—90分钟,切片呈黄褐色,即在显微镜下观察,见真菌呈黑褐色为止。
7、蒸馏水洗
8、滴入0.1%氯化金溶液调色2—3min
9、流水冲洗5min
10、2%硫代硫酸钠液处理2—5min
11、流水冲洗
12、用亮绿液复染20—40s,或用橙黄G复染1—2s
13、快速水洗
14、95%乙醇和无水乙醇脱水,二甲苯透明,封片。
结果:各种真菌均被着色,菌丝和孢子呈明显的黑褐色,抗酸杆菌也呈黑褐色。背景为淡绿色(用亮绿复染时)或橙黄色(用橙黄G复染时)或红色(用伊红复染时)。
实验注意事项:
客户提供:
1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg,或者提供石蜡切片;
2、样本运输:组织样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
交付标准:
1、图片;
2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
1、为了获得菌体及背景清晰的染色效果,首先必须做好准备工作,染色过程需用的玻璃器皿要洁净,尽量避免使用过久的蒸馏水配制试剂,建议使用双蒸水,这样才能保证六胺银工作液的纯度,避免杂质沉淀影响观察。
2、其次病理技术人员应掌握常见真菌的一般形态特征,并根据实验室的具体情况选择合适的孵育条件,摸索孵育时间和温度。
3、在显微镜下观察染色程度时,低倍镜下颜色不要太黑,至深棕褐色即可,经0.1%氯化金溶液调色后,真菌从深棕褐色变成棕黑色,真菌壁和孢子着色。
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